“生物化学实验”理论知识考查题

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1、1.酶有什么不同于一般催化剂的特性？在酶的分离纯化过程中要注意哪些环节？1、高效性2、专一性3、条件温和4、酶活性的可调控性5、酶催化的活性与辅酶、辅基和金属离子有关6、不稳定易失活酶是一种特殊的蛋白质，在分离纯化过程中需要注意温度以及PH值等的控制，注意在纯化过程中所使用的缓冲溶液的离子强度的控制(常用PBS缓冲溶液)，在实际纯化过程中，一般要在低温冰箱中进行，缓冲溶液中注意加入EDTA二钠盐(1-5mM)螯和重金属离子一般避免酶失活。2.如何评价蛋白质纯化方法的优劣？判断分离提纯方法的优劣，一般用两个指标来衡量，一是总活力

2、的回收；而是比活力的提高倍数。理想的分离提纯方法希望比活力和总活力越高越好，但两者往往不可兼得。因此在考虑分离条件和方法时，需要在比活力多提高一些和总活力多回收一些作适当的选择。3、纯化蛋白质的层析方法有哪些？凝胶过滤层析；离子交换层析；疏水层析；亲和层析；聚焦层析；高效液相层析。4、请回答QSepharose-柱层析法纯化蔗糖酶的基本原理是什么？离子交换剂是以纤维索或葡聚糖凝胶等不溶性物质为母体，通过酯化、醚化或氧化等化学反应．引入阳性或阴性离子基团的特殊制剂．可与带相反电荷的化学物质进行交换吸附。QSepharose柱代表

3、季氨基琼脂糖色谱，以琼脂糖作为不溶性母体引入季铵型基团，为强阴离子交换剂。酵母蔗糖酶的等电点为5.0左右，在Tris-HCl缓冲液（pH7.3）下带负电。在pH7左右，QSepharose凝胶带正电，与带负电的蔗糖酶结合。洗脱液中的离子基因与结合在离子交换剂上的蛋白质离子基团相竞争时．亲合力小的蛋白质分子先被解吸而洗脱下来，而亲合力大者则后被解吸．而后洗脱下来。因此依靠增加缓冲液的离子强度和(或)改变酸碱度．即可改变蛋白质的吸附状态，使不同亲合力的蛋白质得以分离。5.什么是酶活力？根据实验体会，在进行酶活力测定时要注意哪些问题

4、？什么是酶活力:酶活力也称为酶活性，是指酶催化一定化学反应的活力。测定酶活力实际就是测定酶促反应的速度，一般采用测定酶促反应初速度的方法来测定酶活力。酶促反应速度可用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。酶催化反应速度愈大，酶活力愈高，反之活力愈低。酶活力测定的注意事项:（1）量取时要用专门的移液管，每次加入新的试剂立即混匀。将各试管内液体混合均匀。震荡混匀。移液管使用方法，按减少量加入准确。（2）测吸光值要求：测定数据在（0.1-0.7A），波动可以到0.2-0.8，最小不能小于0.1，最大不能超过1.0。

5、要求R2值接近1，至少0.999。（3）稀释样品要从低到高的顺序，即C→B→A，因为容量瓶用的同一个，防止污染使浓度有改变。（4）做酶水解蔗糖反应：稀释酶液和蔗糖反应前要在35度水浴锅预热，每个试管准确计时，每个单独反应单独结束。加入0.05毫升，2mol/LNaOH/ml，立即摇匀！（5）测反应液吸光度：从各水解反应液中取出适合量的体积（V测）。用移液管量取每种反应液应先取对照后取反应液。如果测得的OD值结果不在标准曲线还原糖范围内，则可增加或减少取样量，加倍或减半，直到OD值在标准曲线范围内为止。P.S酶活力测定的注意事项

6、给的答案跟老师PPT上的答案不一样，然后我选择了老师PPT上的答案。6.请回答酶活力、酶活力单位、酶的比活力的含义？酶活力也称为酶活性，是指酶催化一定化学反应的活力。测定酶活力实际就是测定酶促反应的速度，一般采用测定酶促反应初速度的方法来测定酶活力。酶促反应速度可用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。酶催化反应速度愈大，酶活力愈高，反之活力愈低。酶活力单位是酶活力的度量单位。酶活力单位可以自己定义，1个酶活力单位是指在特定条件（25℃或其它最适条件）下，在单位时间内能将一定量底物转化成产物所用的酶量。国际酶

7、学委员会于1961年规定,在确定的最适反应条件下,每分钟催化1μmol底物转变成产物所需的酶量为一个酶活力单位,单位符号为IU或U。比活力(性)是酶纯度的量度,比活力指的是每毫克蛋白质所具有的酶活力单位数，一般用酶活力单位/mg蛋白质表示。酶的比活力在酶学研究中用来衡量酶的纯度，对于同一种酶来说，比活力越大，酶的纯度越高。利用比活力的大小可以用来比较酶制剂中单位质量蛋白质的催化能力，是表示酶的纯度高低的一个重要指标。7、Folin-酚试剂法测定蛋白质浓度的基本原理是什么，此法有什么优缺点？此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只

8、是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深蓝色的原因是：在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基还原，产生深蓝色（钼兰和钨兰的混合物）