组胺产生菌的筛选及鉴定【开题报告】

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1、毕业论文开题报告生物工程组胺产生菌的筛选及鉴定一、选题的背景与意义组胺（histamine）为一种生物胺,可在许多动、植物中发现。由于它是由微生物作用于其前体---组胺酸而产生的,普遍认为食物中存在着组胺[1]。比如水产品中最具毒性的生物胺是组胺，组胺通过与细胞膜上的两类受体（H1和H2）作用而发挥毒性。在鱼体中游离组氨酸在组胺酸脱羧酶催化下，发生脱羧反应形成组胺。当机体摄入组胺超过100mg时，即可引起过敏性食物中毒[2]。鲭科鱼类体内含有较多游离的组氨酸，含量随鱼种类的不同而变化。如金枪鱼约为15g/kg，而鲱鱼则仅为1g/kg。组胺是海洋鲭科鱼类中含

2、量最多和最主要的生物胺，因此组胺含量常被作为检测这类水产品腐烂变质程度的指标。组胺属于单胺类神经递质,参与多种生理病理活动过程,如对睡眠、摄食、体温、精神情感性疾病的调节[3]。组胺本身又有强大和广泛的药理作用，主要影响血管、平滑肌和腺体的功能[4]。①对血管的作用：组胺可使小动脉、毛细血管和小静脉扩张，使循环血量相对减少，以及毛细血管通透性增加②对平滑肌的作用：组胺使支气管平滑肌痉挛，引起呼吸困难。③对胃液分泌作用：组胺对胃液分泌具有高度选择性，在尚不致使血压下降的小剂量时即能显著促进其分泌。组胺是Ⅰ型变态反应(变态反应性疾病发病率约占全球人口的30%~

3、40%,其对人类的危害极大)中最重要的炎性介质,深入研究组胺,对食物过敏的防治具有重要的意义[5]。组胺生成菌普遍存在于海水环境中,也生活在活鱼的鳃和内脏中[6]。当鱼体存活时,该细菌不对鱼产生危害。一旦鱼死亡,鱼的防御系统就破坏,在适宜温度下,组胺菌就迅速生长并产生组胺。市售鱼类存在组胺安全隐患，在加工调理时温度控制不当，食用时就会引起组胺的中毒现象发生。然而，虽有相关的卫生标准，但近年来鱼体中组胺含量超标而引起的中毒事件屡有发生[7,8]。主要原因是有些人对鱼类及海产品的可食性与组胺含量有关缺乏了解，不清楚组胺含量是评价鱼类及海产品腐败程度的重要指标。

4、随着经济的繁荣、食品安全问题越来越受社会的关注，人们不仅仅局限于吃饱，还要考虑吃的安全和营养，因此，通过对组胺进行研究和认识可以提高和改善食品的质量及安全性。并且组胺原本就具有药理和毒理学作用，因此通过对组胺的研究可以更好的驾驭这种化学活性物质，使其弊端减为最小，使其益处为人所用，充分利用这种活性物质。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题：1组胺产生菌的筛选。配制筛选产组胺的培养基，从鱼体中进行产组胺菌的分离筛选。2组胺产生菌的鉴定。进行产组胺菌的生理生化鉴定，及PCR鉴定。三、研究的方法与技术路线：研究方法检样25g样品+225mL0.1%(w/v)st

5、erilePeptoneWater，匀质涂布选择2-3个合适的稀释度的样品匀液，取适量的样液涂布到不同的平板中，两个平行10倍系列稀释1总菌数与各类菌的测定各平板计数，报告15℃7天步骤1稀释1．1倒平板将VRBG琼脂培养基、PI琼脂培养基、TCBS琼脂培养基以及组氨菌选择培养基加热溶解，冷却至55-60℃时，分别到平板。1．2称取25g样品放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。1．31mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸

6、头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。1．4按1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。1．5根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液，在进行10倍递增稀释时，吸取适量的匀液涂布到各平板中。每个稀释度做两个样，同时，分别吸取适量的空白稀释液涂布到各平板中作为空白组。2培养各平板置于15℃±1℃的恒温箱中培养7天.（24℃,24h）3菌落计数参考国标4结果报告参考国标2组胺菌的二步筛选法检样25g样品+225mL0.1%(w/v)

7、sterilePeptoneWater，匀质10倍系列稀释涂布选择2-3个合适的稀释度的样品匀液，吸取适量的样液涂布到倒好的平板中，依据菌落特性随机选取一些菌落，纯化,后4℃下保存于TSA斜面中，待用35℃24h挑取TSA斜面中的菌株接种到组胺菌选择培养基平板中培养35℃24h观察菌落特性，是否出现有紫色光晕的紫色菌落，有则为阳性将所有阳性菌落接种到组胺酸肉汤培养基，测产组胺活性报告结果实验步骤1稀释1．1倒平板将VRBG琼脂培养基、PI琼脂培养基、TCBS琼脂培养基以及组氨菌选择培养基加热溶解，冷却至55-60℃时，分别到平板。1．2称取25g样品放入盛

8、有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2m