药典三部(2015版)-通则-3503人用狂犬病疫苗效价测定法(NIH法).doc

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1、3503人用狂犬病疫苗效价测定法（NIH法）本法系将供试品免疫小鼠后，产生相应的抗体，通过小鼠抗体水平的变化测定供试品的免疫原性。试剂稀释液（PBS）量取0.9%磷酸二氢钾溶液75ml、2.4%磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）溶液425ml、8.5%氯化钠溶液500ml，混合后加水至5000ml，调pH值至7.2～8.0。攻击毒株CVS制备启开毒种，稀释成10-2悬液，接种10～12g小鼠，不少于8只，每只脑内接种0.03ml，连续传2～3代，选择接种4～5天有典型狂犬病症状的小鼠脑组织，研磨后加入含2%马血清或新生牛血清制成20

2、%悬液，经每分钟1000转离心10分钟，取上清液经病毒滴定（用10只18～20g小鼠滴定）及无菌检查符合规定后作攻击毒用。参考疫苗的稀释参考疫苗用PBS稀释成1:25、1:125和1:625等稀释度。供试品溶液的制备供试品用PBS做5倍系列稀释。测定法用不同稀释度的供试品及参考疫苗分别免疫12～14g小鼠16只，每只小鼠腹腔注射0.5ml，间隔1周再免疫1次。小鼠于第一次免疫后14天，用经预先测定的含5～100LD50的病毒量进行脑内攻击，每只0.03ml；同时将攻击毒稀释成100、10-1、10-2和10-3进行毒力滴定，每个稀释度均不

3、少于8只小鼠。小鼠攻击后逐日观察14天，并记录死亡情况，统计第5天后死亡和呈典型狂犬病脑症状的小鼠。计算供试品和参考疫苗ED50值。计算相对效力：P=TS×dTdS×D式中P为供试品效价，IU/ml；T为供试品ED50的倒数；S为参考疫苗ED50的倒数；dT为供试品的1次人用剂量，ml；dS为参考疫苗的1次人用剂量，ml；D为参考疫苗的效价，IU/ml。【附注】（1）动物免疫时应将疫苗保存于冰浴中。（2）各组动物均应在同样条件下饲养。（3）攻击毒原病毒液（100）注射的小鼠应80%以上死亡。