培养基的制备与灭菌.doc

《培养基的制备与灭菌.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、........实验八培养基的制备与灭菌一、目的要求1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。2.掌握培养基的配置方法。3.掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法。二、基本原理正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代谢类型的多样性．因而用于培养微生物的培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。但一般培养基的配制程序却大致相同．例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。三、实验材料1.药品：待配各种培养基的组成成分、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶

2、液。2.仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。3.其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。.学习参考.........2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁

3、皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。图8-1移液管的包扎（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，

4、折叠打结，准备灭菌。（二）液体及固体培养基的配制过程1．液体培养基配制1)称量：一般可用0.01g天平称量配制培养基所需的各种药品，先按培养基配方计算出各成分的用量．然后进行准确称量。2)溶解：将称好的药品置于一烧杯中，先加入少量水(根据实验需要可用自来水或蒸馏水)，用玻璃棒搅动，加热溶解。3)定容：待全部药品溶解后，倒入一量筒中，加水至所需体.学习参考.........积。如某种药品用量太少时，可预先配成较浓溶液，然后按比例吸取一定体积溶液，加入至培养基中。1)调pH：一般用pH试纸测定培养基的pH。用剪刀剪出一小段pH试纸，然后用镊子夹取此段pH试纸，在培养基中蘸一下，观看

5、其pH范围，如培养基偏酸或偏碱时，可用1mol/LNaoH或1mol/LHCl溶液进行调节。调节pH时，应逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。边加边搅拌，并不时用pH试纸测试，直至达到所需pH为止。2)过滤：用滤纸或多层纱布过滤培养基。一般无特殊要求时，此步可省去。2．固体培养基的配制配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸，再将称好的琼脂(1.5~2％)加入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底烧焦。继续加热至琼脂全部融化，最后补足因蒸发而失去水分。（三）培养基的分装根据不同需要，可将已配好培养基分装入试管或三角瓶内，分装时注意不要使培养基沾污管

6、口或瓶口，造成污染。如操作不小心，培养基沾污管口或瓶口时，可用镊子夹一小块脱脂棉，擦去管口或瓶口的培养基，并将脱脂棉弃去。1．试管的分装取一个玻璃漏斗，装在铁架上，漏斗下连一根橡皮管，橡皮管下端再与另一玻璃管相接，橡皮管的中部加一弹簧夹。分装时，用左手拿住空试管中部，并将漏斗下的玻璃管嘴插入试管内，以右手拇指及食指开放弹簧夹，中指及无名指夹佐玻璃管嘴，使培养基直接流入试管内。装入试管培养基的量视试管大小及需要而定，若所用试管大小为15×150.学习参考.........mm时，液体培养基可分装至试管高度1／4左有为宜；如分装固体或半固体培养基时，在琼脂完全融化后，应趁热分装于试

7、管中。用于制作斜面的固体培养基的分装量为管高1／5(约3—4mI)，半固体培养基分装量为管高的1／3为宜。2．三角瓶的分装图8-2培养基的分装用于振荡培养微生物时，可在250m1三角瓶中加入50m1的液体培养基；若用于制作平板培养基用时，可在250m1三角瓶中加入150ml培养基，然后再加入3g琼脂粉(按2％计算)，灭菌时瓶中琼脂粉同时被融化。（四）棉塞的制作及试管、三角瓶的包扎为了培养好气性微生物，需提供优良通气条件，同时为防止杂菌污染，则必须对通入试管或三角瓶内空气预先进行过滤除菌。通常