修饰标记引物的介绍.pptx

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1、修饰引物的介绍储存条件冻干引物和稀释成储液的引物建议储存在-20°C.HEX,、TET和FAM对光敏感。应储存在黑暗处或用琥珀色管子储存。推荐放入黑色盒子中。染料暴露在光下半衰期(大约)HEX4.5hoursTET2.25hoursFAM1.125hoursHEX和TET标记的寡核苷酸在PCR30个循环内都是稳定的；但是在不利的环境中（高PH，高温），TET比HEX稳定。稀释方法对于非Cy类的荧光标记引物，建议用TE稀释，浓度高于10uM。Cy3和Cy5标记的引物在碱性条件下易降解，用中性溶液溶解。稳定性冻干的引物在-20°C能够稳定一年。在4度能够稳定几个月。储液在-20°C能够

2、稳定至少六个月，在4度能够稳定几个星期。AP偶联引物-放在AP储存液中运输，储存在4度，能够稳定12个月。HRP偶联引物-放在HRP储存液中运输，储存在4度，能够稳定12个月。修饰对OD值的影响有些荧光基团在260nm处也有吸收光:这些修饰包括：FAM,Fluorescein,HEX,TAMRA,andTET。其它在260nm处可能也有吸收值，但是数据没有公布，因此计算时不包括在里面。APandHRP偶联的寡核苷酸:蛋白和核苷酸都有OD值，但是可能不会影响寡核苷酸的真实OD值。合成规模和纯化方式ModSynthPurificationPurificationPurification

3、PurificationScaleDesaltedCartridgeHPLCGelPurified5'Biotin5'Phosphate5'PrimaryAmine25NYes(10-50bases)NONONO50NYes(10-50bases)NONONO200NYes(10-50bases)NOYes(7–60bases)Yes(7-100bases)1UYes(10-50bases)NOYes(7–60bases)Yes(7-100bases)25UYes(10-50bases)NOYes(7–60bases)Yes(7-100bases)5'Rhodamine25NNON

4、ONONO50NYes(5-100bases)Yes(7–60bases)Yes(7–60bases)Yes(7-100bases)200NYes(5-100bases)Yes(7–60bases)Yes(7–60bases)Yes(7-100bases)1UYes(5-100bases)Yes(7–60bases)Yes(7–60bases)Yes(7-100bases)25UYes(5-100bases)Yes(7–60bases)Yes(7–60bases)Yes(7-100bases)5'HEX/TET/FAM5'Fluorescein5'GATEWAY25NYes(10-

5、50bases)NONONO50NYes(5-100bases)Yes(7–60bases)Yes(7–60bases)Yes(7-100bases)200NNONOYes(7–60bases)Yes(7-100bases)1UYes(5-100bases)Yes(7–60bases)Yes(7–60bases)Yes(7-100bases)25UYes(5-100bases)Yes(7–60bases)Yes(7–60bases)Yes(7-100bases)APConjugateHRPConjugate**25NNONONONO50NNONONONO200NNONONONO1U

6、NONOYes(7–60bases)Yes(7-100bases)25UNONOYes(7–60bases)Yes(7-100bases)Phosphorothioates25NNONONONO50NYes(5-100bases)Yes7–60bases)YES(7–60bases)YES(7-100bases)200NYes(5-100bases)Yes(7–60bases)YES(7–60bases)YES(7-100bases)1UYes(5-100bases)Yes(7–60bases)YES(7–60bases)YES(7-100bases)25UYesNOYES(7–6

7、0bases)YES(7-100bases)合成规模是25nnol时，合成的寡核苷酸不能小于10bp。问题：此表和网站上的不一致，是不是现在在中国不论合成规模大小，都能合成小于10bp的寡核苷酸呢？生物素生物素修饰能够耐受热和pH（它能被加热到100度并暴露在pH2-10）。其它极端的环境可能也能耐受，但是还没有被检测。还原剂可能不会影响生物素修饰，但是没有精确的数据。生物素寡核苷酸通过OD260进行定量（生物素在260没有吸收光）。生物素化的DNA能够成功的转化进入