课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.pptx

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1、课题2土壤分解尿素的细菌的分离与计数课标领航1．举例说明什么是选择培养基，并研究培养基对微生物的选择作用。2．设置重复组和对照组，对土壤中分解尿素的细菌进行分离和计数。【重点】选择培养基的作用。【难点】菌落数目的统计。课题背景1、尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶一、研究思路(一)筛选菌种1实例：寻找耐高温的DNA聚合酶启示：DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（9

2、30C）的DNA聚合酶。寻找目的菌种时要根据它对_______________，到相应的环境中去寻找。生存环境的要求耐高温的酶耐高温生物体耐高温环境（热泉、火山口）寻找寻找Taq细菌筛选原因:因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。2实验室中微生物的筛选原理人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。②该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素思考：①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属于哪类培养基？固体培养基选

3、择培养基③此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？原则上能。培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。3选择培养基：在微生物学中，将允许______________________，同时_________________________生长的培养基。特定种类的微生物生长抑制或阻止其他种类微生物4要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等；配置合适的培养基方法：⑴抑制大多数微

4、生物生长⑵造成有利于该菌生长的环境，结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板法等方法对它进行纯化培养分离。（1）将土壤中的固氮菌分离出来（2）将土壤中自养微生物分离出来举一反三（3）筛选出抗青霉素的微生物（4）筛选出耐高浓度食盐的微生物不加氮源的无氮培养基不加含碳有机物的无碳培养基加入青霉素的培养基加入高浓度食盐的培养基思考：④怎样证明此培养基具有选择性呢？以尿素为唯一氮源的培养基牛肉膏蛋白胨培养基是分离尿素细菌判断该培养基有无选择性实验组对照组培养基类型是否接种目的结果只生长尿素细菌生长多种微生物是如何对细菌进行计数？1显微镜直

5、接计数：利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。缺点:不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；2.间接计数法（活菌计数法）⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。⑵常用方法：稀释涂布平板法。每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。(二)统计菌落数目方法运用稀释涂布平板法来统

6、计样品中的活菌数。原理1个菌落←1个活菌①选择菌落数在30～300的平板上计数。②需培养计算出三个或三个以上的平板菌落求平均数。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。注意事项看课本P22，并讨论你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？第一位同学：没有重复实验（至少涂布3个平板）第二位同学：A组结果误差过大，不应用于计算平均值计算公式：某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）()A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.4B(三

7、)设置对照实验阅读P22～23页“（三）设置对照”一段讨论教材中提出的问题。设置对照的目的：排除实验组中非测试因素对试验结果的影响，提高实验结果的可信度。(1)A同学出现此结果的可能原因？⑴土样不同⑵培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质)(2)设置对照实验，帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素？小结：这个实例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。结果预测：如果结果与A同学一致

8、，则证明______；如果结果不同，则证明A同学存在_____________________________________A无误操作失误或培养基的