课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.pptx

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1、尿素分子的立体结构CO（NH2）2+H2OCO2+2NH3脲酶课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、研究思路美国黄石国家公园的一个热泉（一）筛选菌株水生耐热细菌Taq(Thermusaquaticus)——耐高温的TaqDNA聚合酶美国微生物学科布鲁克1966年发现耐热细菌1、实验室微生物的筛选原理（P21）人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。（一）筛选菌株一、研究思路2、选择培养基在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物

2、生长的培养基，称做选择培养基。（一）筛选菌株一、研究思路加入青霉素的培养基——细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长不加含碳有机物的无碳培养基——分离自养型微生物1.在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是是什么物质？碳源是葡萄糖，氮源是尿素2.分析该配方的培养基对微生物是否具有选择作用？如果有，又是如何进行选择的？有筛选作用。尿素是培养基中的唯一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。阅读22页本课题使用的培养基配方（二）微生物计数1、显微镜直接计数法1mm一、研究思路每一个大方格

3、边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。1mm下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数是多少?1ml菌液中的总菌数?(1ml=1cm3=1000mm3）5AB×1045A缺点：不能区分死菌与活菌2、统计菌落数目——稀释涂布平板法（二）微生物计数平板菌落数统计注意事项1、几个菌落粘连一起，只要肉眼能区分，就算几个；2、不管菌落大小，只要肉眼看得

4、见，就应该计数；3、菌落数目过多时，可以合理采用样方法。某班级菌落数统计表格第1组第2组第3组第4组151216519095256820717716235721781881024平均每mL样品中活菌数平板组别恰当的稀释度、正确的涂布操作是成功地统计菌落数目的关键。（取样0.1mL,稀释倍数106）思考1：如何根据平板上的菌落数推测出每mL样品中的菌株数？统计某一稀释度下平板上的菌落数，计算出平板上的菌落数的平均值，然后按公式每mL样品中的菌株数=（C÷V）×M进行计算。思考2：统计的菌落数往往比活菌的实际数目

5、高还是低，为什么？低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。思考3：为了增强实验结果的说服力和准确性，我们在实验设计时应该怎么做更合理？实例分析1第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，但是其中1个平板的计数结果与另外2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。想一想：哪位同学的结果更接近真实值？你认为这两位同学的实验

6、需要改进吗？如果需要，如何改进？（三）实验基本原则1、平行重复原则一、研究思路实例分析2想一想：A同学和其他同学所得实验结果差异如此之大，请分析原因可能有哪些？①②实例分析2想一想：你能通过设置对照，帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？一种方案：可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验。如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。实例分析想一想：你能通过设置对照，帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？另一种方案：将A同学配制的培养基在

7、不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的！实例启示设置对照实验的目的是什么？排除实验操作、培养条件等无关变量对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。（三）实验基本原则1、平行重复原则2、对照原则3、单一变量原则一、研究思路实验名称：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验原理：实验目的：材料用具：方法步骤：1、分组编号2、处理（遵循实验设计的基本原则）对照原则、单一变量原则（等量原则）科学性原则、平行重复原则可行性原则3、观察记录（设计观察记录表

8、）实验预期：实验结果的分析与评价：实验结论：设计时请利用P23-P24的三个资料二、实验设计二、实验设计（对照原则、单一变量原则、平行重复原则）资料一.土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。二、实验设计资料二.样品的稀释将样品液稀释，选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30-300之间，适于计数的平板。分离不同的微生物能采用相