月季花药培养.ppt

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1、知识回顾单倍体育种的过程？花药离体培养（N）单倍体植株（N）秋水仙素处理，使染色体翻倍植株（2N）特点：1明显缩短育种年限2后代植株都为纯合子。正常植株（2N）课题2月季的花药培养花中皇后月季又称“月月红”，自然花期5至11月，开花连续不断，通常扦插就可以成活。实验操作花的结构花托花萼花瓣雄蕊花药花丝雌蕊柱头花柱子房（一）被子植物的花粉发育1雄蕊一、基础知识2花粉的概念:由花粉母细胞经过减数分裂形成的单倍体的生殖细胞.花丝花药合作探究1、一个小孢子母细胞经过分裂完成后能形成几个精子？2、被子植物花粉发育过程中的四分体时期与减数分裂过程中的四分体时期是同

2、一阶段吗？3、产生花粉植株有哪两种途径？原因是什么？4、为什么花瓣松动会给消毒带来困难？小孢子母细胞花粉母细胞小孢子减数分裂_____分裂花粉管细胞核生殖细胞核____分裂__个精子1个营养细胞生殖细胞4个4个4个4个4个8个（小孢子四分体时期单核居中期单核靠边期双核期）两个精子和一个营养核的基因型相同?2有丝有丝注意：①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成）4个小孢子减数分裂有丝分裂4个花粉管细胞核4个生殖细胞核有丝分裂8个精子1花粉母细胞③②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形

3、成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个花粉管细胞核和两个精子。例题1：两个精子和花粉管细胞核的基因型相同？2NNNN被子植物子房的结构胚珠的结构花粉管精子卵细胞极核子房壁珠被珠孔知识扩展花雄蕊雌蕊花药花粉粒精子精子子房胚珠胚囊子房壁珠被卵细胞两个极核受精卵受精极核胚胚乳种皮种子果皮果实有丝分裂有丝分裂1n1n2n1n3n2n2n2n2n胚是一个新个体的幼体发育结果（二）产生花粉植株的两种途径①②移栽花药中的花粉胚状体脱分化愈伤组织花药中的花粉脱分化分化丛芽再分化丛芽诱导生根体细胞胚（胚状体）：在组织培养过程中，某些细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非

4、常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似原因：培养基中的激素种类及浓度配比1.为什么胚状体和愈伤组织到丛芽分别称为分化和再分化？思考2.花粉植株弱小，高度不育，是否就没有利用价值？用于单倍体育种技术，可明显缩短育种周期，培育纯合新品种。胚状体就像种子，有胚芽、胚轴、胚根等结构。胚状体到丛芽就是由原始的分化状态继续生长和分化完成的。而愈伤组织形成丛芽的过程是从脱分化状态进入再分化形成丛芽的过程。部分花药通过胚状体途径形成小植株烟草花药培养胚状体发育途径愈伤组织转接种到再生培养基愈伤组织分化形成再生植株水稻花药培养愈伤组织发育途径部分花药产生愈伤组织接种在平板

5、上的水稻花药（三）影响花药培养的因素a.材料选择什么时期最好，为什么？b.如何选择单核期细胞？c.还有哪些影响花药培养的因素？阅读P38-39思考：诱导花粉植株能否成功及成功率的高低，主要影响因素是和。培养基的组成材料的选择花期为初花期，花粉发育在单核靠边期，成功率最高。选择完全未开放的花蕾亲本植株的生长条件、材料的预处理及接种密度等。讨论：1.不选择单核期之前花药原因：2.不选择单核期之后花药原因3.选择完全未开放花蕾的原因花药质地幼嫩，容易破碎花瓣开始松动，给材料消毒带来困难困难完全未开放的花蕾，可挑选到单核期的花药，菌少、易消毒实验操作一、材料的

6、选取二、材料的消毒三、接种和培养（一）材料选取2、通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。方法：醋酸洋红法(将染色体染成___色)焙花青-铬矾法(花粉细胞核染成____色)。1、从花药看：月季的初花期从花粉看：单核期从花蕾看：完全未开放的花药（载玻片上）→1%的醋酸洋红1滴→用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成红色）花药（在卡诺氏固定液中处理20min）→取出，置于载玻片上→焙花青－铬矾溶液染色→盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色）红蓝黑（二）材料的消毒（无菌吸水纸）吸干水分（0.1％氯化汞溶液）2～4min（无菌水）冲洗花蕾

7、（70％酒精）大约30s（无菌水）清洗1.与菊花外植体的消毒相比较，有何不同？为什么？在酒精消毒前，花药不需要预先用流水冲洗、洗衣粉洗涤和软刷刷洗。因为月季花蕾外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。2.为什么花瓣松动会给消毒带来困难？花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。（三）接种和培养1灭菌后花蕾，要在下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。3通常每瓶接种花药，温度控制在左右，。幼小植株形成后才。2在剥离花药时，要尽量（否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底，

8、因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，