牛乳中酪蛋白的制备.ppt

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1、实验四牛乳中酪蛋白的制备目的要求学习从牛乳中分离纯化酪蛋白的原理和方法。实验原理牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，乙醚除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。水→洗涤水溶蛋白、杂质乙醇→脱水乙醇：乙醚→过渡洗涤乙醚→脱脂试剂和器材试剂：95%乙醇；无水乙醚乙醇—乙醚混合液(V/V=1∶1)自己配制5+5共10毫升0.2mol/LpH4.7醋酸—醋酸钠缓冲液;冰乙酸材料纯牛奶(蒙牛)器材：水浴锅；低速离心机1

2、．将20mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7醋酸缓冲液20mL。用精密试纸调pH值至4.7。2.将上述悬浮液冷却至室温。转移至4个离心管中离心10min(3000r/min)弃去上清液，得酪蛋白粗制品。3．用4毫升/管水洗沉淀，合并在两个离心管中，离心5min(3000r/min)，弃去上清液；再水洗涤一次。操作方法4．用95%乙醇洗沉淀1次，离心5min(3000r/min)，弃去上清液。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀1次。最后用乙醚洗沉淀1次，各离心5min(3000r/min)。洗涤试剂用量4毫升/管5．将沉淀摊开在培养皿上，

3、电吹风吹干；得酪蛋白纯品。6．准确称重，计算含量酪蛋白g/100mL牛乳（g%）,并和理论含量为3.5g/100mL牛乳相比较，求出实际得率。离心注意事项：1.样品倒入玻璃离心管不能太满；2.离心前玻璃离心管（套上塑料管套）放在天平上平衡好；3.离心机中对称放置；4.接通电源前确认速度旋钮是否归零，调节定时旋钮设定时间，按开始键开始离心，缓慢调节速度至实际需要速度。5.等到离心机完全停止后，机盖取出离心管。1．制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？思考题