（浙江专用）高考生物二轮复习专题八生物技术实践第17讲微生物的利用与酶的应用教案.docx

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1、第17讲　微生物的利用与酶的应用[考纲要求]　1.大肠杆菌的培养和分离。2.分离以尿素为氮源的微生物。3.果汁中的果胶和果胶酶。4.α淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测。1．培养基与微生物培养提醒　(1)LB固体培养基添加琼脂等凝固剂，用于单菌落的分离。(2)全营养LB培养基与尿素固体培养基：①全营养LB培养基(含琼脂糖)是基础培养基；②尿素固体培养基：选择培养基(如以尿素作为唯一氮源的尿素培养基)和鉴别培养基(如尿素培养基中加入酚红)。(3)加入尿素前的固体培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，尿素溶液用G

2、6玻璃砂漏斗过滤。2．灭菌与消毒的比较类型适用范围操作方法及注意点消毒方法煮沸消毒法日常生活100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高温的液体70～75℃煮30min或80℃煮15min化学药剂水源或生物体结构部分等擦拭，如用70%酒精擦拭双手；成熟紫葡萄用高锰酸钾浸泡5min；外植体在70%酒精中浸泡10min，再放入5%次氯酸钠溶液中浸泡5min，然后用另一5%次氯酸钠溶液浸泡5min紫外线房间、仪器设备紫外线照射30min热水泡菜坛等热水清洗坛内壁两次灭菌方法灼烧接种环、接种时用的试管口或瓶口等

3、直接在酒精灯火焰的外焰烧红接种环或试管口和瓶口过火高压蒸汽灭菌生产和实验室常用器具，如培养基、培养皿等高压蒸汽灭菌锅内，条件一般为1kg/cm2，温度121℃，15min(若为葡萄糖，则灭菌条件为500g/cm2压力，温度90℃以上，30min)；灭菌时间从高压锅内有压力后开始；高压锅或灭菌锅压力和大气压相同时才能打开锅盖过滤灭菌尿素等加热会分解的物质G6玻璃砂漏斗过滤。G6玻璃砂漏斗使用前用纸包好进行高压蒸汽灭菌；G6玻璃砂漏斗使用后用1_mol/L盐酸浸泡，抽滤去酸，再用蒸馏水洗至洗出液呈中性，

4、干燥后保存其他操作空间：专门的接种室；操作设备：超净台(用前打开紫外灯和过滤风，用时关闭紫外灯，台面用70%酒精擦拭)；操作环境：酒精灯火焰旁3．微生物分离的两种常用方法的比较项目划线分离法涂布分离法操作原理连续划线。由于划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将

5、被分散成单个细胞，从而能在培养皿表面形成单个菌落操作工具接种环玻璃刮刀使用要求用时需灼烧放置在70%酒精中，用时需灼烧分离特点操作简单，不易分离获得单菌落操作复杂，易分离获得单菌落分离结果(图示)相同点使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种提醒　划线分离操作的注意事项(1)每次划线之前及最后一次划线之后都需要灼烧接种环。(2)灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。(3)划线时最后一区域不要与第一区域相连。(4)划线用力大小要适当，防止

6、用力过大将培养基划破。4．大肠杆菌的培养与分离操作(1)原理①接种在LB液体培养基中使其快速分裂增殖。②将待检测微生物样品通过划线分离法或涂布分离法接种在LB固体培养基上，样品中的每一个细胞都可以生长繁殖形成单个菌落。(2)流程5．分离以尿素为氮源的微生物(1)实验原理①筛选以尿素为氮源的微生物，使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养。②有些细菌合成的脲酶能通过降解尿素作为其生长的氮源。③细菌合成脲酶能将尿素分解成氨，使培养基的碱性增强，pH升高，从而使加入酚红指示剂的培养基变红。(2)操作步骤提

7、醒　分离以尿素为氮源的微生物中的易错点(1)误以为分离以尿素为氮源的微生物时，配制的培养基中加入酚红作为酸碱指示剂，加入琼脂作为凝固剂。应加入琼脂糖作为凝固剂。(2)误以为降解尿素的反应中反应物只有尿素。降解尿素的反应中反应物除了尿素外还有水。(3)误以为尿素灭菌采用高压蒸汽灭菌法。尿素遇高温会分解，所以其灭菌方法为G6玻璃砂漏斗过滤除菌。6．探究酶活性最适条件和用量的实验设计(1)探究影响果胶酶活性因素实验的分析①实验原则：遵循单一变量原则、对照原则，严格控制变量，尽量减少无关变量的影响。②实验原

8、理：果胶酶活性受温度、pH或酶抑制剂的影响，在最适温度或pH时，其活性最高，果肉的出汁率、果汁的澄清度都与果胶酶的活性大小呈正相关。(2)三个实验的变量分析实验名称(目的)自变量因变量注意事项探究温度对果胶酶活性的影响温度果汁量(澄清度)①底物和酶在混合时的温度是相同的；②温度梯度越小，实验结果越精确；③苹果泥和果胶酶的用量在各个试管中应相同；④pH应为最适pH探究pH对果胶酶活性的影响pH果汁量(澄清度)①温度应为最适温度；②pH梯度可用NaOH和HCl溶液调节；③