课题2　月季的花药培养 (3).ppt

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1、课题2:月季的花药培养花药花丝雄蕊柱头花柱子房萼片胚珠花瓣花托雌蕊图1花的基本结构（一）被子植物的花粉发育1.雄蕊一、基础知识由花粉母细胞经过减数分裂形成的单倍体的生殖细胞.花药：囊状结构，内有很多花粉花丝2.花粉的概念:3.花粉发育阶段：小孢子四分体时期；单核期；双核期4.花粉的发育过程思考：1.被子植物花粉发育过程中的四分体时期与减数分裂的四分体时期是同一阶段吗？小孢子四分体时期小孢子母细胞(2n)()时期(n)单核()期(n)双核期(n)()细胞核(n)()细胞核(n)()细胞(n)()细胞(n)（)个精子(n)()分裂()分裂单核()期(

2、n)()分裂减数小孢子四分体居中靠边有丝生殖生殖花粉管营养有丝24.花粉的发育过程（二）产生花粉植株的两种途径①②移栽花药中的花粉胚状体脱分化愈伤组织花药中的花粉脱分化分化丛芽再分化丛芽诱导生根体细胞胚（胚状体）：在组织培养过程中，某些细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似，胚芽，胚轴，胚根等结构完整，就像一颗种子原因：培养基中的激素种类及浓度配比（三）影响花药培养的因素阅读P38-39思考：诱导花粉植株能否成功及诱导成功的高低，主要影响因素是____________和___________-材料的选择培养基的组

3、成a.材料选择什么时期最好，为什么？b.如何选择单核期细胞？c.为什么花瓣松动会给消毒带来困难？d.还有哪些影响花药培养的因素？花期为初花期，花粉发育在单核靠边期，成功率最高。亲本植株的生长条件，材料的预处理及接种密度等选择完全未开放的花蕾微生物可能侵入花药，给材料消毒带来困难实验操作一、材料的选取二、材料的消毒三、接种和培养（一）材料选取2、通过来_____确定是否处于适宜的发育期。方法：醋酸洋红法(将染色体染成红色)焙花青-铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色)。1、从花药看：从花粉看：从花蕾看：花药（载玻片上）→1%的醋酸洋红1滴→用镊柄将花药捣碎

4、，盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成红色）花药（在卡诺氏固定液中处理20min）→取出，置于载玻片上→焙花青－铬矾溶液染色→盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色）月季的初花期单核靠边期完全未开放的镜检花蕾0.1%的氯化汞溶液2~4min70%的酒精(大约30s)无菌水(清洗)无菌水冲洗3~5次（二）材料的消毒无菌吸水纸吸干（三）接种和培养①损伤花药，容易从受伤部位产生愈伤组织，即得不到单倍体③在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，染色体组的数目常常会发生变化.（主要原因是营养核和生殖核融合造成的）所以还需要对培养出来的植株作

5、进一步的鉴定和筛选。思考：1、为何不能损伤花药且要彻底去除花丝？2、培养时需要注意哪些事项？①每瓶接种花药7~10个，温度控制在250C左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。②花药开裂长出愈伤组织或释放胚状体。长出愈伤组织要及时转移到分化培养基上，释放的胚状体，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，否则这些植株将很难分开②因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。课题成果评价选材是否恰当选材是否成功是花药培养成功的关键。应学会通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉。无菌技术是否过关如果出现了污染现象，说明某些操作步骤，如培养基灭菌、花蕾消

6、毒或接种等有问题。接种是否成功如果接种的花药长出愈伤组织或释放出胚状体，花药培养的第一步就成功了。要适时转换培养基，以便愈伤组织或胚状体进一步分化成再生植株。课题成果评价谢谢