课题2　月季的花药培养 (3).ppt

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1、课题2月季的花药培养花的基本结构(一)被子植物的花粉发育一、基础知识1.花的基本结构花花托花萼花瓣花蕊雄蕊雌蕊花丝花药柱头子房(胚珠)花柱2、请说出被子植物雄蕊的结构？雄蕊花丝花药多数被子植物的花药由4个花粉囊组成，花粉囊外由囊壁包围，内生许多花粉粒。3、请说出被子植物花粉的发育过程？当花粉囊的壁组织逐步发育分化时，会形成大量的花粉母细胞（小孢子母细胞）。1花粉母细胞减数分裂4个小孢子有丝分裂4个花粉管细胞核4个生殖细胞核形成8个精子形成营养细胞生殖细胞有分注意：①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。（精子在花

2、粉管中形成）②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。③两个精子和一个营养核的基因型相同。产生花粉植株的途径有哪几种？（二）产生花粉植株的途径花粉花粉胚状体愈伤组织从芽从芽生根移栽再分化诱导脱分化途径1：花粉通过胚状体阶段发育为植株；途径2：花粉在诱导培养基上先形成愈伤组织，再将其诱导分化成植株。是否只有花药的培养才能得到胚状体？人工种子人工种子又称人造种子、合成种子或无性种子，就是将组织培养所产生的体细胞胚（由体细胞经脱分化形成的）、不定芽、顶芽、

3、腋芽或小鳞茎等繁殖体，包裹在能提供营养的胶囊（人造胚乳）里，再在外面包上一层具有保护功能和防止机械损伤的外膜（人造种皮），造成一种类似种子的结构，能在一定的条件下萌发生长，形成完整植株。某些体细胞可培养成与合子发育成的胚非常相似的胚状体结构。具有胚芽、胚根、胚轴，就像一颗种子。（三）影响花药培养的因素主要的影响因素：材料的选择与培养基的组成1、不同种植物的诱导成功率很不相同。2、同种植物，亲本植株的生理状况对诱导成功率有直接影响。（1）同一植物不同的花期。花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。一般，月季的花药培养时间选在五月初

4、到五月中旬，即月季的初花期。影响花药培养的因素（2）花粉发育时期：一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧时，花药培养成功率最高。选择完全未开放的花蕾，可挑选到单核期的花药，菌少、易消毒；花瓣松动，菌多，消毒困难。3、此外，亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种密度对诱导成功率都有一定的影响。二、实验操作材料的选取材料的消毒接种和培养（一）材料的选取1、选择花药一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。2、确定花粉发育时期最常用方法：醋酸洋红法。某些植物的花粉细胞核不易着色，则需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉

5、细胞核染成蓝黑色。注：花粉细胞核内有染色体，染色体主要由DNA和蛋白质组成，醋酸洋红为碱性染色剂，染色体容易被染色。通过染色，可以确定细胞核为单核期还是双核期，是单核居中期还是单核靠边期。一般单核靠边期的花药培养成功率最高。为了挑选到单核期的花药，通常选择什么样的花？为什么？选择完全未开放的花蕾。为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？花花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料消毒带来困难。（二）材料的消毒1、花蕾用体积比为70%的酒精浸泡30秒；2、无菌水清洗；3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分；4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶

6、液中2-4分钟（也可用质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）；5、无菌水冲洗3-5次。用于培养的花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。（三）接种和培养1、接种时为什么要尽量不损伤花药？灭菌后的花蕾，要在无菌条件下除去萼片和花瓣，彻底去除花丝后将花药接种到培养基上。在剥离花药时，要尽量不损伤花药，否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织。2、接种时为什么要彻底去除花丝？因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。（三）接种和培养3、试管苗形成之

7、前是否需要光照？长出愈伤组织或胚状体后怎样处理，为什么？不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则，这些植株将很难分开。为什么要对培养出来的植株作进一步的鉴定和筛选？因为在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性变化。