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1、白JAI)试细胞粘附抑制住验研究的进展浙江医科大学祝文姻综述,白细胞枯附抑制(LAI)试验由澳大利现并粘附于小室玻璃表面时这种早期粘附aa·。亚学者Hnidy1972年首先创立`“当是否可能用抗原诱导而发生抑制?通过小鼠ayI),时Halild用巨噬细胞移动抑制(MM实验性肿瘤研究表明如有相应抗原浸出。,试验研究肿瘤免疫为寻找简单快速的体外液则带瘤小鼠的腹腔细胞粘附率降低(表,,MM。细胞免疫测定方法作者设想工试验的1)培育时间缩短到1小时或细胞从毛细管口出表1肿瘤漫出液诱导白细胞粘附抑制白细胞来源(腹腔细胞)抗原浸出液粘附细胞(肠)(M士SD)39士15肿瘤B(移植后9天P<0.0011
2、5士1214士11肿瘤.L(移植后13天)P二000124士18,也有人用cnogr加入带瘤小鼠的血清腹腔细胞又恢复Fiol卜Uofin等密度梯度法。。正常粘附由于本法比其它体外细胞免疫测分离白细胞,。定方法简单迅速立即引起广泛注意1973:,Laert,试验方法年mp首先将此法应用于临床以、1.:Hallay。后各国学者相继对本试验的方法反应机计数板法本法由id创立、应用范围和临床评价等各个方面进行了白细胞与肿瘤抗原于37理℃水浴作用30分钟,,广泛研究结果证明LAI试验是一种简(对照组用营养液或正常组织或其它无关肿便、迅速、敏感、特异和重复性好的体外细瘤抗原代替肿瘤抗原),将细胞悬液滴
3、入血。。,胞免疫测定方法现将有关问题简介如下细胞计数板并于37c温育(湿匣)1小,,时显微镜下计数有核细胞数漂洗除去未、一试验方法,粘附细胞后在同样范围内作粘附细胞的计:,、,杭原制备,目前数算出粘附百分数标准误用t测验分析提取抗原的方法很多’·。,。“多数学者采用冷PBS浸出液即新鲜有无统计学意义或以粘附抑制指数表示PBS,上清肿瘤组织用冷匀浆后经高速离心加抗原的粘附细胞百分数~1一~X100肠粘附抑制折数一o()不加抚不细丽c4oc原丙而可蔽液测定蛋白后小量分装置20一备丽。、。用也可用氯化钾过氯酸方法提取本法的优点为细胞粘附的基质就是计数;,,白细胞分离一般采用自然沉降法取细胞的工具
4、因此二次细胞计数只需一次加,,,,血浆层并除去其中夹杂的红细胞经洗涤样不存在因加样而产生的误差但由于漂·“7。,。后用营养液配成10一10细胞/毫升的悬液洗除去不粘附细胞不易掌握故不易推广281一一.:oan,,2试管法Hl等首先来用试管法测平置于湿匣中37℃温育2小时温育前后、`。SS-,后Gro定带瘤小鼠的细胞免疫性此各取一滴悬液注入计数板在同样范围内作er,Rutherford等相继用试管法检测动物和(温育后取得的细胞为未粘附有核细胞计数,,人类各种肿瘤的细胞免疫性均获满意结果细胞)算出未粘附细胞百分数(NA%)“·。;。。x1mm本法以1650的试管作为细胞用统计学方法检验实验组和
5、对照组的差异,:粘附的基质加入定量细胞与抗原的试管水或计算未粘附细胞指数(NAI)加特异抗原的NA肠一加非特异性抗原的NA肠NAI二X100加非特异抚原的NA肠,,.:本法简便易行大家乐于采用并有不3微量塑料板法Holt等应用微量细。。。〕2次计数简化少改良方法最近许多学者将胞毒试验用的塑料板进行LAI试验细,一,,O,为温育后i次计数NAI=(AB)/BX10037c2胞与抗原加入小孔温育小时洗去A为加特异抗原的未粘附细胞数,B为,Gemsa细i其中未粘附胞粘附细胞用染色后镜7。,,t测加非特异抗原的不粘附细胞数国内尚检计数按下列公式进行计数并用验检。有用链霉素小瓶代替试管作为细胞粘附基
6、质查其统计学意义。吕的报导一:x1白细胞、附抑制,一(卜-)0絮飞暴箫窝黯,,Hol,owe,austPllMlih等人的实验此外还有毛细管法及同位素法但应。···’2’“’`用较少表明,随着试验方法的发展细胞计数方法也.,。1细T淋巴细胞与应的胞为其根参反有许多改良最初在普通显微镜或相差显微:,据为镜下计数细胞以后应用血细胞自动计数。,esonL’。lL(1)用白蛋白密度梯度法将白细胞分法最近ve等应用印象分析法ageanalss,ez,(imyi)在Lit相差显微为24个含不同比例细胞的组分分别试验其,LAI活性,%淋巴细胞的组分中得到镜上银一电视照相机计数板上的细胞便录在含96,LA
7、I阳性反应,于阴极线屏幕上屏幕上的细胞数经电子分证明参与反应主要是淋巴细。。析并记录胞(2)用0抗血清预先处理脾细胞及用、二反,应机理抗人胸腺细胞山羊IgG预先处理致敏细胞、。正常人或癌症病人的外周血白细胞具有均可使LAI活性消失(表23)。。3)P粘附于玻璃或塑料表面的特性在含有10%(淋巴细胞不参与LAI反应用Fcs,70T细胞的免疫原PVP(聚乙烯毗咯烷的培养液中白细胞粘附率在45~%不依赖`’,,,PVP在体外作
