细菌总数的测定.doc

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1、.细菌总数的测定（平皿计数法）1.概述本法适用于生活用水、循环冷却水及其它水中细菌总数的测定。也适用于反渗透脱盐水中细菌总数的测定。敞开式循环冷却水系统细菌总数的要求：≤1×105个/mL。2.方法介绍本法采用25号浮游生物网收集循环冷却水中的黏泥，所得的黏泥用石英砂充分研磨使细胞分散，再利用平皿计数技术在（29±1）℃培养72h来测定黏泥中的细菌总数。3.试剂和材料3.1牛肉膏，生化试剂。3.2蛋白胨，生化试剂。3.3NaCl.3.4琼脂，生物试剂。3.5NaOH溶液，40g/L。3.6HCl，1＋11溶液。

2、3.7乙醇溶液，75％。3.8牛皮纸。3.9医用脱脂棉。3.10医用脱脂纱布。3.11石英砂，210～150μm。4.仪器和设备Word资料.4.125号浮游生物网。4.2量筒，25mL和500mL。4.3转子流量计。4.4瓷研钵。4.5无菌箱（室）或超净工作台。4.6蒸汽压力灭菌器。4.7生化培养箱。4.8电热干燥箱，温度可控制在[（60～280）±2]℃.4.9刻度吸管，1mL和5mL。4.10磨口三角瓶，100mL。4.11容量瓶，1000mL。4.12培养皿，d90mm。4.13三角瓶，500mL。4.

3、14搪瓷量杯，1000mL。5.试验前的准备5.1培养基的制备称取下列试剂：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g,琼脂15.0g。将上述试剂加水约950mL，在电炉上加热溶解后，趁热用四层医用脱脂纱布过滤于搪瓷量杯中，并用热水补充至1000mL。用NaOH溶液或HCl溶液调节pH值至7.2±2，并分装在500mL三角瓶中，每瓶分装量不超过其总容量的2/3。塞上棉塞，用牛皮纸把瓶口包好，用蒸汽压力灭菌器在（121±1）℃Word资料.下灭菌15min,此为灭过菌的培养基。5.2无菌稀释水的制备5.2

4、.1生理盐水的配制。称取8.50gNaCl溶解在1000mL水中，混匀。5.2.2将生理盐水分装在100mL磨口三角瓶中，每个三角瓶塞子和瓶口间插入一小纸片，塞紧瓶塞，每个瓶子的瓶口均用牛皮纸包扎以防污染，用蒸汽压力灭菌器在（121±1）℃下灭菌15min。5.3刻度吸管的灭菌5.3.1将洗净并烘干后的吸管粗端塞上医用脱脂棉，棉花量要适宜，长度大约10～15mm，棉花不宜露在口外，多余的棉花可以用火焰烧掉。5.3.2每支刻度吸管用一条约40～50mm宽的牛皮纸条，以450o左右螺旋形卷起来，吸管的尖端在头部，粗

5、端用多于的纸条折叠打结，不使散开，标上量度，若干支扎成一束，置电热干燥箱中，于（160±2）℃下灭菌2h。5.4培养皿的灭菌将洗净并烘干后的培养皿10个左右叠在一起，用牛皮纸卷成一筒，置电热干燥箱中，于（160±2）℃下灭菌2h。5.5石英砂灭菌将洗净烘干后的石英砂装入磨口三角瓶中，按无菌稀释水包扎、灭菌的方法包扎灭菌。6.测定步骤Word资料.6.1样品的采集6.1.1调节采样装置中的阀门，使冷却水的流速控制在0.8m/s左右，水流量在1m3/h左右，然后关上浮游生物网旋塞阀，过滤1m3水。6.1.2关闭水阀

6、，取下浮游生物网，打开旋塞阀，将黏泥收集在500mL量筒内，用自来水冲洗滤网，洗涤液也收集在500mL量筒内，沉淀30min后倾出上层清液。将剩余浊液转移至25mL量筒内，静置30min，记录沉淀出的黏泥体积。循环冷却水中的黏泥量V（mL/m3）按下式计算。V2V=——V1式中V2———量筒中黏泥总体积，mL；V1———通过浮游生物网过滤的循环水量，m3.6.1.3用无菌吸管移去25mL量筒内的上清液，将量筒内的黏泥或部分黏泥（体积为V3）转移至洗净并烘干的瓷研钵中，加入约2g灭过菌的石英砂，充分研磨后转移至1

7、000mL洗净并烘干的容量瓶中，用无菌稀释水稀释至刻度，充分混匀，此为黏泥水样，应立即进行测定。6.2无菌箱（室）灭菌把试验所用的无菌稀释水、外线灯灭菌30min。6.3黏泥水样的稀释和接种6.3.1无菌培养皿、无菌吸管等用品放入无菌箱（使）内，打开紫外线灯灭菌30min。6.3.2Word资料.关掉紫外线灯，打开荧光灯，黏泥水样放入放入灭过菌的无菌箱（室）中，立即用75％乙醇溶液浸泡的医用脱脂棉球擦手，点燃无菌箱（室）内的酒精灯。以下6.3.3～6.3.8的操作应在无菌箱（室）内的火焰区进行。6.3.3选择适

8、宜的稀释度，应使最后一个稀释度接种后平皿上生长的菌落数小于300个。在空白稀释水样瓶上标上稀释度数。6.3.4用10倍稀释法稀释黏泥水样，即用5mL无菌吸管吸取5mL黏泥水样注入到45mL空白稀释水中充分摇匀，此时稀释度为10－1。6.3.5另取一支5mL无菌吸管吸取5mL稀释度为10－1黏泥水样注入第二个稀释水中，充分摇匀，此时稀释度为10－2.依次类推，直至需要的稀释度为止。6.3