细菌菌落总数的测定.doc

《细菌菌落总数的测定.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、《技能训练库》综合技能实训指导书实训项目名称细菌菌落总数的测定学时6学时实训目的1.掌握细菌菌落总数测定的程序2.学会国标法测定菌落总数的方法和技能一、定义菌落总数:食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。二、设备和材料恒温培养箱、冰箱、恒温水浴箱、天平、均质器、1mL和10mL无菌吸管或微量移液器及吸头、250mL无菌锥形瓶、90mm无菌培养皿、pH计或精密pH试纸。三、培养基和试剂（制法见附录A）平板计数琼脂培养基、磷酸盐缓冲液、无菌生理盐水。四、操作步骤（一）样品的稀释1.固

2、体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。2.液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。3.用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管

3、或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。4.按3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。5.根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。6.及时将15mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。（二）培养1．待琼脂凝固后，将平板翻转，36

4、℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。2．如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按1条件进行培养。（三）菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示。1．选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数

5、。2．其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。3．当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。五、结果与报告(一)菌落总数的计算方法1．若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。2．若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算：N=∑C/(n1+0.1n2)

6、d…………………………………（1）式中：N——样品中菌落数；∑C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d——稀释因子（第一稀释度）。示例：稀释度1:100（第一稀释度）1:1000（第二稀释度）菌落数（CFU）232，24433，35N＝∑C/(n1+0.1n2)d＝232+244+33+35/[2+(0.1×2)]×10-2＝544/0.022＝24727上述数据修约后，表示为25000或2.5×104。3．若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度

7、最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。4．若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。5．若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。6．若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU～300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。（二）菌落总数的报告1．菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。2．菌落数大于或等于100CFU时，第3

8、位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；