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《半乳糖苷酶菌株的分离选育及鉴定.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、a-半乳糖昔酶菌株的分离选育及鉴定豆制晶作为人类很好的食物以及营养来源得到广泛的关注，然而豆类中含有大量詢抗营养因子a•半乳糖昔，不易消化并引起肠道不适铮不良症状。虽然一些传统的加工方弍可以去除一定的a•半乳糖昔，但往往加工中或是需要额外的能量及机械力等,大大的壇加了商品的成本；或是加入一些有机试剂，作为食品，引入了不安全隐患。随着生物工程技术的不断完善，工业徴生物发酵产的绿色酶制剂被广发的应用.而漆加a■半乳履苔酶的是目前消除a•半乳糖昔最有效安全并被智過应用的方法・此外，豆粕作为成品饲料最主要的原料之一，所含大量*半乳糖昔也使饲料的瑜强率降低。作为第三代饲料酶制剂，a•半
2、乳糖夺酶在饲料业中也得到更广迁的关注，有巨大的应用潜力。能生产a・半乳糖昔酶的菌种很多•但可实现工业化生产的菌种需要具有较高的躍活的同时，符合生产安全性。因此*实验从中国传统发酵豆制品以及实验室保存的工业安全菌种入手，筛选高产a•半乳糖甘酶菌种。随后通过诱交育种，釆用形态、分子、BIOLOG生化分析相结合的方法鉴定菌种，以期获得遗传稳定姓良好的高产突变株。2・1材料与仪器2.1.1菌株和林料本试验所用菌株（黑曲靈、米曲霉.青霉、少鮑根零.里氏木霉、粮酒酵母、克鲁维酵母、假丝醉母）来自于浙江大学食品科学研究所微生物发酵实验室保存菌株。菌种筛选所用发酵食品包括：豆腐乳、酱酷、豆鼓
3、、纳豆，购自市场。2.12主要仪器设备YP600型电子天平（上海第二天平仪器厂）;b-PHS-9V型pH计（杭州华光无纹电厂）：LRH-250生化培养箱（恒温培养箱）（上海一恒科技有限公司）；ZHWY・2102振荡培养箱（上海智城分析仪鑒制逍有限公司）；TH-3560M汽灭菌锅（台湾造食企业有限公司）；SWVJ-1FD趙净工作台（苏净集团安泰公司制造）；BRATT-Stulab-6纯水仪（上海宝尔水处理有限公司）；IMS系列全自动制冰碎冰机（江苏格林电器有限公司）；DK-8D型电热恒溫水槽（上海一姮科技有限公司）；L-550台式低速大容苣离心机（卡沙湘仪离心机仪器有限公司）；
4、PTC220PCR仪（伯乐生令医学产品有限公司）：DYY-I1型电泳仪（北京六一仪器厂）；JS-380A自动最胶图像分析仪（杭州诺丁科学器材有限公司）；Eppendorf5417-冷凉离心机（上海艾本穗生物技术国际贸易有眼公司）：TU-1801双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器疽限责任公司）：MicruLog4.20.04自动微生物鉴定系统（美国BIOLOG公司）；2.13主要试剂对硝基苯《a・D•半乳糖昔（p・NPG）（Sigma公司）；X-a-Gal（Ciontech公司）；榨子糖（Sigma公司）；（NHhHPO4.KH2PO4、Na2HPO4.Na2SO4xN
5、aNO3,Na2CO3,NH4NOUMgSO4-7H2O.NaCl、（NHJ2SO4、Na^PO/HQ、CaCI2-2H2O.K2HPO4>FeSO4-7H2O,牛肉膏、荷萌糖、酵母漫膏、贵白腺、琼脂等均为国产分析纯：麦芽汁自制，糖度：10・12波美度（°Bx）；马铃第市售；fTaq酶（含PCRbuffer和Mg"）、dNTP以及DL2000DNAmarker等（宝生物工程大连有限公司）；DNA胶回收试剂盒（上海生工生物工程技术服务有限公司）；异丙醇（色谱纯）（天津*0^精细化学品有限公司）等；2.1.4焙养基(1)斜面种子焙养基:细菌培获基：采用牛肉膏蛋白牒琼脂培养基，即牛
6、肉膏3g,蛋白腺10g,NaCl5g,琼脂15-17g,蒸馆水1000mL,pH7.4；酵母培获基：麦芽汁琼脂培养基，即10°Bx-12°Bx自制新鲜麦芽汁1000mL,琼脂15-20g,pH5・5・6・0；丝状真菌培养基：马铃薯菴萄糖琼脂焙养基（PDA）,即马铃»200g,葡萄翳20g.琼脂l5-20g,蒸馆水1000mL,pH自然。（2）初停培养基，细茵培养基：（NH）2HPO40.5g,KH2PO413g.Na2HPO43.2g,Na2SO40,8g,NaNO3lg,葡萄務3g,棉子糖Sg,琼脂15-20g,恭憎水1000mL,X-a-Gal2mL,pH74°詳母菌培养
7、基：醛母f10g.蛋白膝20g,葡萄糖15g,棉子糖5g・琼脂15-20g,蒸馆水1000mL,X-a-Gal2mL,pH5・5・6・0。尊菌培养基:NaNO33g,K2HPO4Ig,MgSO4*7H2O0.5g,KC10.5g,FeSO4-7H2O,裁萄糊20g,棉子糖I0g,琼脂15-20g,蒸tS水1000mLtX-a-Gal2mL,pH自然。（3）复筛培养基细菌培养基：（NHhSCUg,MgSO4-7H2O0.2g,KH2PO40.5g,Na2HPO40.5g,CaCI-2H2OO.lg,葡萄糖
