分光光度计线性分辨范围测定.ppt

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1、生物化学实验南京农业大学生命科学学院生物化学与分子生物学系1实验一分光光度计线性分辨范围测定2一、实验目的学习分光光度计的工作原理掌握比色测定的基本操作掌握标准曲线的制作及最佳浓度范围的确定3二、实验原理当光线通过透明溶液介质时，其辐射的波长有一部分被吸收，一部分透过、因此光线射出溶液之后，部分光波减少，这种光波的吸收和透过可用于某些物质的定性定量分析。Lambert-Beer定律的适用范围4从上式可以看出，一束单色光通过溶液后，光波被部分吸收，其吸收多少与溶液浓度和溶液厚度（光径）成正比对于同一台分光光度计而言，入射光光强不变

2、；对于某一待侧物而言，摩尔消光系数为常数，当光径也保持不变时，吸光度与溶液浓度在一定范围内成正比相对比较的概念5三、实验材料及设备1、仪器UV9100分光光度计2、器材普通试管：25mL×9移液管：2mL×1烧杯：250mL×1洗耳球、滴管：各2洗瓶、试管架、移液管架：各16四、试剂的配制硫氰化铁（Fe(SCN)3）溶液称取8.95gKSCN和5.00gFeCl3·6H2O，蒸馏水溶解后定容至2L药品取用时务必规范操作！德国女科学家违规稀释浓硫酸导致毁容7五、操作步骤1、教师现场演示如何使用分光光度计2、取9支试管，按下表所示操

3、作8六、结果处理1、由0~8号管的数据，以硫氰化铁含量为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制曲线自学使用软件绘制2、根据曲线分析分光光度计线性分辨范围9七、思考题1、在用分光光度计做比色测定时，标准溶液的浓度范围应怎样选定？待测样品溶液的浓度应稀释在什么范围？请自行讨论，说出你的理由。2、比色时，设一个“0”号管的意义是什么？10