酶的基本性质实验——底物专一性、激活剂和抑制剂、最适温度.ppt

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1、实验六酶的基本性质实验——底物专一性、激活剂和抑制剂、最适温度丁鸣一、目的要求1.了解酶的专一性。2.掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。3.学会排除干扰因素，设计酶学实验。二、基本原理酶是一种具有催化功能的蛋白质。酶蛋白结构决定了酶的功能——酶的高效性，酶催化的反应（酶促反应）要比相应的没有催化剂的反应快103～1017倍。酶催化作用的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化反应。根据各种酶对底物的选择程度不同，它们的专一性可以分为下列几种：Ⅰ.酶的基本性质——底物专一性

2、1.相对专一性一种酶能够催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。2.绝对专一性：有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。3.立体异构专一性有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。采用Benedict试剂检测反应产物

3、。Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。Na2CO3+2H2O2NaOH+H2CO3CuSO4+2NaOHCu(OH)2+Na2SO4还原糖(—CHOor—C=O)+2Cu(OH)2Cu2O+2H2O+糖的氧化产物（砖红色或黄色）在分子结构上，淀粉几乎没有，而蔗糖全无半缩醛基，它们均无还原性，因此它们与Benedict试剂无呈色反应。淀粉被淀粉酶水解，产物为葡萄糖；蔗糖被蔗糖酶水解，其产物为果糖和葡萄糖，它们都为具有自由半缩醛羟基的还原糖，与Be

4、nedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。本实验以此颜色反应观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉和蔗糖的水解作用。（醛基）（酮基）三、实验材料与试剂1、实验材料⑴蔗糖酶液(样品Ⅳ）;⑵新鲜唾液（含唾液淀粉酶）；2、实验试剂⑴蔗糖酶液蔗糖酶液(样品Ⅳ），使用浓度可参考“实验四蔗糖酶的酶活力测定”实验的情况来选择酶的稀释倍数（加蒸馏水稀释），备用；⑵唾液淀粉酶液（学生自制）取0.5mL唾液至50ml量筒中，用蒸馏水（稀释）到50ml，用棉花过滤备用。唾液稀倍数因人而异，可稀释50～400倍，甚至更高；⑶5%蔗糖（A.R.）溶液；⑷0.5%淀

5、粉溶液（含0.3%NaCl）；⑸Benedict试剂；四、实验器材与仪器1.漏斗，2.脱脂棉花；3.恒温水浴（37℃，100℃）；4.量筒；5.试管及试管架；6.烧杯；7.吸量管。五、实验操作方法和步骤㈠检查试剂取3支试管，按下表操作：试管编号试剂处理1230.5%淀粉（0.3%NaCl）溶液(ml)35%蔗糖溶液(ml)3蒸馏水(ml)3Benedict试剂(ml)222摇匀，置沸水浴煮沸2～3min记录观察结果注：①检查目的：试剂是否有干扰因素存在。②也可对蔗糖酶液、唾液淀粉酶液进行检查是否也有干扰因素存在，请自己设计。123

6、检查试剂试管编号：㈡淀粉酶的专一性取三支试管，按下表操作：试管编号试剂处理1230.5%淀粉（0.3%NaCl）溶液(ml)35%蔗糖溶液(ml)3蒸馏水(ml)3唾液淀粉酶液(ml)111摇匀，置37℃水浴保温10minBenedict试剂(ml)222摇匀，置沸水浴煮2～3min记录观察结果注：可增加一组唾液淀粉酶液经100℃加热3min处理后的样品对照组。123123淀粉酶的专一性试管编号：注：可增加一组蔗糖酶液(样品Ⅳ）经100℃加热3min处理后的样品对照组。㈢蔗糖酶的专一性取三支试管，按下表操作：试管编号试剂处理123

7、0.5%淀粉（0.3%NaCl）溶液(ml)35%蔗糖溶液(ml)3蒸馏水(ml)3蔗糖酶液(样品Ⅳ）(ml)111摇匀，置37℃水浴保温10minBenedict试剂(ml)222摇匀，置沸水浴煮2～3min记录观察结果123123蔗糖酶的专一性试管编号：六、结果分析讨论七、思考题1．观察酶专一性实验为什么要设计这3组实验？每组各有何意义？蒸馏水有何用？2．将酶液煮沸10min后，重做二、三的操作，观察有何结果？3．在此实验中，为什么要用0.5%淀粉(0.3%NaCl)溶液？0.3%NaCl的作用是什么？八、注意事项1.试管要干

8、净，所有试剂加量准确，加好试剂后要摇匀。2.使用试剂时不要人为造成试剂间的互相污染；试剂用好瓶盖要立即盖好，防止试剂间的互相污染。以免实验结果的错误。Ⅱ.影响酶活性的因素——激活剂和抑制剂一、实验目的和要求1.了解激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响