质谱在肽和蛋白质序列分析中的应用.pdf

《质谱在肽和蛋白质序列分析中的应用.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、万方数据撇年第＆卷第2期．8l。90有机化学C}1il唧JmlrTd甜血g“c㈨岬Vd22．蕊幔№2．8l一90·综述与进展·质谱在肽和蛋白质序列分析中的应用陈晶付华陈益赵玉芬*062A(清华大学生命科学与工程研究院，化学系生命有机磷化学教育部重点实验室北京100084)摘要了解肽和蛋白质的序列对理解其功能具有重要意义，测定其序列也是当前生命科学研究中的重要内容之一质谱作为高灵敏度的测定分子结构的仪器，其高灵敏度、广泛的适用性及快速性等特性使它具有很大潜力发展成为辅助传统测序方法的新方法，并得到了广泛的关注．从离于活化方法(包括碰撞诱导解离C

2、Ⅲ、源后裂解PSD、源内裂解IsD等)、衍生化作用以及氨基酸残基消除方式(高能活化产生亚稳离子、化学降解、酶降解)等多个角度介绍r利用质谱分析多肽和蛋白质序列的方法，并对其发展前景作出展望关键词肽和蛋白质，质谱，序列测定Alpp吐c蚶蚰of№唧暾灯伽啪ontbeseql圳咖ofn邮andPI慨CHEN，jingFU，HuaC}Ⅱ烈，YiZ}n0，Yu—Fen。(凸舢砌’圳矿c^删嘶蒯曲删西卿能咖，∞曲皿曲如嘶，＆洳增』删)A概t雎icient蛐dallt哪dcme出0ds0fseqI

3、enciIlgPe皿d器卸dpmteinsarealway

4、stherrmtd即哪dedtech“quesinbiolo画calre8earch．As8p而si“gt001蝴theelucida6叫0fmokcularsⅡuct嘴．m阻s8pec乜衄’eⅡyII鹅b兕nu8edint}圯s8quenci“gofpepndes龃dPmteinsfbrsevemIyea玛．nllask船Ⅲ世啪re柚dⅡ腓珊pIllariIl血ebiologicalwork，TIli8paperI卧i嗍tIlediⅡjrenlrIletllods佃tIlistechnique，whjchi眦ludetlleacdv86伽r

5、ne【Ilod吕(∞llisi∞-activateddissoci蚵加．p憾t∞ul℃ed。c8y，insoufoedecay，矗of．)，dedv“ve打dlu即ceandsoon．KI了wordspepti抵皿dprateills，啪ssspec岫tIy，s。quencirIg作为生命的物质基础之一，蛋白质在催化生命体内各种反应进行、调节代谢、抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用．现代研究结果发现越来越多的小肽同蛋白质一样具有生物功能，建立具有特殊、高效的生物功能肽的肽库是现在的研究热点之一．因此需要高效率、高灵敏度的

6、肽和蛋白质序列测定方法支持这些研究的进行．现有的肽和蛋白质测序方法包括N末端序列测定的化学方法——Ed∞n法、c末端酶解方法、C末端化学降解法等，这些方法都存在一些缺陷．例如作为肽和蛋白质序列测定标准方法的N末端氨基酸苯异硫氰酸酯(phenylis0曲ocyaIlale)PⅡ℃分析法(即‰法，又称删法)【l工J，测序速度较慢(50个氨基酸残基／天l3。)；样品用量较大(r-ml级或几十pn∞l级)；对样品纯度要求很高；对于修饰氨基酸残基往往会错误识别，而对N末端保护的肽链则无法测序．c末端化学降解测序法则由于无法找到Pn℃这样理想的化学探针，

7、其发展仍面临着很大的困难l⋯．在这种背景下，质谱由于很高的灵敏度、准确性、易操作性、快速性及很好的普适性而倍受科学家的广泛注意．在质谱测序中，灵敏度及准确性随分子量增大-B捌：廿“@md“岫u岫．饥Re晤vedMⅡdIl9，如I；朋侧】tm“，200l；a删耐Ju玎e29，20叭万方数据82有机化学有明显降低，所以肽的序列分析比蛋白容易许多，许多研究也都是以肽作为分析对象进行的．早在70年代就已经有质谱用于肽序列分析的报道【5·“，但由于当时质谱的准确性较差，应用范围窄，没有进行深入研究近年来随着电喷雾电离质谱(electmpmvionisa

8、tionEsI)及基质辅助激光解吸质谱(mⅡix—assistedlaserdesorp正oⅡ／jonizad叽，MALDIj两种软电离技术的发展与完善(原理见综述1741)，极性肽分子的分析成为可能，检测限下降到‰l级别．可测定分子量范围则高达100000Da，同时也出现r多种基于这两种质谱的蛋白测序方面的应用及研究方法l肽和蛋白质序列的质谱测定方法质谱用于肽和蛋白质的序列测定主要可以分为三种方法．一种方法叫蛋白图谱(pmteinmpp咄)，即用特异性的酶解或化学水解的方法将蛋白切成小的片段，然后用质谱检测各产物肽分子量，将所得到的肽谱数据

9、输入数据库，搜索与之相对应的已知蛋白，从而获取待测蛋白序列㈨1lI，这种方法在本文中不作详细介绍．第二种方法是利用待测分子在电离及飞行过程中产生的亚稳离子，通过分析