食品中微量铁的测定实验指导.doc

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1、实验四邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的1、掌握分光光度计的使用方法和测定原理。2、掌握标准曲线的绘制方法（绘图法、回归法）。二、实验原理在pH2-9的溶液中，二价铁离子能与邻二氮菲生成稳定的橙红色络合物，在510nm有最大吸收，其吸光度与铁的含量成正比，故可比色测定。反应式如下：pH＜2时反应进行较慢，而酸度过低又会引起二价铁离子水解，故反应通常在pH＝5左右的微酸条件下进行。三、仪器和试剂1、仪器：721或722型分光光度计2、试剂(1)10％盐酸羟胺溶液（新配）(2)0.12％邻二氮菲水溶液：避光保存，溶液颜色变暗时即不能使用(

2、3)1mol／L盐酸溶液(4)10％醋酸钠溶液（5）铁标准贮备液：1000μg/mL。准确称取1.000g纯金属铁溶于1+1盐酸50mL中，用水稀释定容至1000mL。（也可用硫酸亚铁配制。准确称取4.979g硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)溶于l00mL水中，加入5mL浓硫酸微热溶解，用水定容至l000mL，摇匀，得标准贮备液）（6）铁标准工作液：10μg/mL。吸取铁标准贮备液10mL，定容至1000mL。四、实验步骤①样品处理：称取均匀样品10.0g，干法或湿法消化后，加入2mL1+1盐酸，在水浴上蒸干，再加入5mL蒸馏水，加热煮沸后

3、移入100mL容量瓶中，以水定容，混匀。②标准曲线绘制：吸取10μg／mL铁标准溶液(标准溶液吸取量可根据样品含铁量高低来确定)0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置于25mL容量瓶中，加入1mol／L盐酸溶液1mL，10％盐酸羟胺1m1，0.12％邻二氮菲lmL，然后加入10％醋酸钠5mL，用水稀释至刻度，摇匀，以不加铁的试剂空白溶液作参比液，在510nm波长处，用1cm比色皿测吸光度，绘制标准曲线。③样品测定：准确吸取样液5-10mL(视含铁量高低而定)于25mL容量瓶中，以下按标准曲线绘制操作，测定吸光度，在标准曲

4、线上查出相对应的铁含量(μg)。五、思考题用邻二氮菲测定铁时，为什么要加入盐酸羟胺?其作用是什么?试写出有关反应方程式。六、实验报告要求用回归法求取标准曲线或excel绘制标准曲线，写出方程式和相关系数，并计算出样品铁含量。