细胞培养技术 教学课件 作者 兰容 周珍辉 主编 章静波 主审 实验部分3细胞培养用品的清洗 包装和消毒.ppt

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1、实验三细胞培养用品的清洗、包装和消毒一、实验目的1.掌握细胞培养常用实验器材的清洗要领、清洗步骤和注意事项。2.掌握细胞培养常用器材的包装要领和要求。3.掌握除菌滤器的安装、使用和拆除方法及操作注意事项。二、实验原理离体条件下，有害物质直接同细胞接触，细胞对任何有害物质十分敏感，极少残留物都可以对细胞产生毒副作用。因此，新的或重新使用的器皿都必须认真清洗，达到不含任何残留物的要求。微生物污染是造成细胞培养失败的主要原因，因此细胞培养用品在培养细胞前，要消毒或灭菌。对细胞培养用品进行消毒前，要进行严密包装，以便于消毒和贮存。三、器材培养皿（3）25mL培养瓶（2）100mL培养瓶（4）

2、尖吸管（5）5mL或10mL移液管（3）血球计数板（1）青霉素小瓶（3）盐水瓶（1）离心管（2）100mL烧杯（1）250mL烧杯（1）50或100mL玻璃注射器1.玻璃器皿：三、器材2.金属器械：解剖刀（1）大号圆头镊（1）眼科剪（3）眼科镊（3）100目金属筛网（1）正压除菌滤器三、器材3.橡胶、塑料制品：青霉素瓶塞（4）小橡皮吸头（6）大橡皮吸头（4）盐水瓶翻口塞（1）针头滤器（5）培养瓶盖（2小、4大）三、器材4.其它：5mL一次性注射器（5）金属饭盒（1）记号笔纱布剪刀棉花棉绳牛皮纸铝箔四、试剂和材料5％盐酸清洁液（酸液）0.5mol/LNaOH0.5mol/LHCl三蒸水

3、75％酒精五、操作（一）玻璃器皿的清洗、包装和消毒1．玻璃器皿的清洗一般经过浸泡、刷洗、浸酸、和清洗四个步骤。1）浸泡新的或用过的玻璃器皿都要先用清水浸泡，软化和溶解附着物。新玻璃器皿使用前得先用自来水简单刷洗，晾干或烘干（50℃）后用5％盐酸浸泡过夜，然后用自来水反复振荡冲洗后备刷洗；用过的玻璃器皿用后应立即浸入清水中备刷洗。2）刷洗将浸泡后的玻璃器皿放到洗涤剂水中，用软毛刷反复刷洗。不要留死角，并防止破坏器皿表面的光洁度。将刷洗干净的玻璃器皿洗净、晾干或烘干（50℃），备浸酸。3）浸酸浸酸是将上述器皿浸泡到清洁液中，又称酸液，通过酸液的强氧化作用清除器皿表面的可能残留物质。浸酸不

4、应少于六小时，一般过夜或更长。浸酸时放取器皿要小心。4）冲洗刷洗和浸酸后的器皿都必须用水充分冲洗，浸酸后器皿是否冲洗的干净，直接影响到细胞培养的成败。手工洗涤浸酸后的器皿，每件器皿至少要反复“注水－倒空”15次以上，最后用三蒸水浸洗2－3次，晾干或烘干（50℃）后备包装用。2．玻璃器皿的包装包装材料常用牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、较大培养皿、铝箔等。小的培养器皿用牛皮纸包装后再装入饭盒内，较大的器皿可以进行局部包扎。3．玻璃器皿的消毒玻璃器皿的消毒可以用高温湿热灭菌（20－30min）和高温干热消毒（160℃保持90－120分钟）。（二）橡胶制品的清洗、包装与消毒1．橡胶制品的清洗

5、橡胶制品洗涤方法：浸泡后，2%NaOH煮沸15分钟，流水冲洗，1%HCl煮沸15分钟(或浸泡30分钟)，流水冲洗，蒸馏水煮沸20分钟，三蒸水浸洗2-3次，晾干或50℃烘干备用。2．橡胶制品的包装细胞培养用的橡胶制品一般较小，用牛皮纸包装后再装入饭盒内。3．橡胶制品的消毒高温湿热灭菌。（三）塑料制品的清洗、包装与消毒1．塑料制品的清洗塑料制品质软、易出现划痕；耐腐蚀能力强、但不耐热。其清洗程序：使用器皿后立即用清水清洗，浸于自来水过夜，用纱布或棉签和50℃稀洗液刷洗，流水冲洗（15－20遍），晾干，浸于清洁液15分钟，流水冲洗（15－20遍）,蒸馏水浸洗三次，三蒸水泡24小时，晾干或5

6、0℃烘干备用。2．塑料制品的包装细胞培养用的塑料制品一般较小，用牛皮纸包装后再装入饭盒内。3．塑料制品的消毒高温湿热灭菌。（四）金属器械的清洗、包装与消毒1．金属器械的清洗放到含洗涤剂的水中，反复刷洗后，自来水反复冲洗干净，晾干，用75％酒精擦拭，自来水反复冲洗干净，最后三蒸水浸洗3次，晾干或50℃烘干备用。2．金属器械的包装较小的金属器械用牛皮纸包装后再装入饭盒内。3．金属器械的消毒金属器械的消毒可以用高温湿热灭菌（20～30min）和高温干热消毒（160℃保持90－120分钟）。（五）正压除菌滤器的清洗、包装与消毒1．正压除菌滤器的清洗放到含稀洗涤剂的水中，反复刷洗后，流水冲洗1

7、5min，漓水，蒸馏水浸泡24h，三蒸水浸泡24h，晾干或50℃烘干备用。2．正压除菌滤器的包装在包装前应将滤膜装好（滤膜在使用前需经三蒸水浸泡过夜，安装时使用两层0.22μm的滤膜，光面朝上），然后用铝箔或牛皮纸包好正压除菌滤器的出液口和进气口，再用棉布将整个正压除菌滤器团团裹住，并捆好。3．正压除菌滤器的消毒121℃高压湿热灭菌20min。（六）针头滤器的清洗、包装与消毒针头滤器的清洗、包装与消毒同塑料制品，但是包装前应将滤膜装好，安装滤膜的注意事项和