植物组织培养.ppt.ppt

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1、植物组织培养AGlimpseofPlantTissueCulture基本实验室布局平面图实验台搁架培养架培养架培养架培养架药品及仪器柜无菌台无菌台搁架拉窗冰箱搁架水槽电炉门4.5m3.0m3.5m4.0m准备室缓冲室无菌室培养室仪器和设备１、烘箱陈列于洗涤室作用：干燥洗后的器皿高温干热灭菌测定培养物的干重气浴２、冰箱陈列于制备室中作用：低温保存材料，存放药品、培养基母液、激素、酶制剂。３、灭菌锅陈列于灭菌室中类型：普通医用消毒锅大的高压灭菌锅作用：培养基、水和各种器皿的消毒４、超净工作台陈列于操作室（

2、接种室）中类型：垂直式和水平式作用：无菌操作用５、酸度计陈列于制备室中作用：测定培养基及酶制剂的ｐＨ值PHS-802中文台式酸度计通用型或经济型酸度计6、显微镜陈列于观察室中类型：倒置显微镜原生质体观察普通显微镜染色体和叶片气孔观察荧光显微镜细胞活力观察解剖显微镜立体观察7、天平陈列于制备室中作用：称取大量元素、微量元素、酶制剂玻璃器皿及用具1、玻璃器皿培养用的：试管、三角瓶、培养皿等显微镜下观察用的：细胞微室、载玻片、培养皿等2、微孔过滤器（细胞过滤器）灭菌用：如激素一般用石棉滤膜3、细胞计数器统计

3、培养细胞的数目4、接种用具如镊子、剪刀、解剖刀、接种针等四、培养条件无菌、温度、光照、湿度、气体成分无菌操作接种时由于有一个敞口的过程，所以是极易引起污染的时期，这一时期主要由空气中的细菌和工作人员本身引起，接种室要严格进行空间消毒。接种室内保持定期用1%—3%的高锰酸钾溶液对设备、墙壁、地板等进行擦洗。除了使用前用紫外线和甲醛灭菌外，还可在使用期间用70%的酒精或3%的来苏儿喷雾，使空气中灰尘颗粒沉降下来。无菌操作可按以下步骤进行：(1)在接种4h前用甲醛熏蒸接种室，并打开其内紫外灯进行灭菌；(2)

4、在接种前20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯；(3)接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等；(4)上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，特别是指甲处。然后擦拭工作台面；(5)先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干；(6)接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；(7)接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外灯灭菌30min。若连续接种，每5天要大强度灭菌一次。在组织培养中，一般都采用22-25℃的恒温条件下进行

5、外植体的培养。对一般植物来讲，都可较好地形成芽和根。但是很多资料表明，温度高低对器官发生的数量和质量仍有影响。如对喜温性植物如茄科、葫芦科、兰科、禾本科等的培养温度一般可控制在26-28℃比较适宜。而对于冷凉性植物如百合科、十字花科、菊科等植物则培养温度可控制在25℃以下较为适宜。培养周期中的昼夜温差，至今，多数植物离体培养，均采用恒温培养。而国内有关小麦、水稻花药培养温度试验的报道认为：在诱导花形成愈伤组织时，昼夜恒温较好，而在器官分化时，昼夜具有一定温差比较好，分化出的小植株比较健壮。菊芋试验也有

6、类似的报道。温度光照(light)组织培养中光照也是重要的条件之一，主要表现在光强、光质、以及光照时间方面1．光照强度(lightintensity)光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响，从目前的研究情况看，光照强度对外植体及细胞的最初分裂有明显的影响。一般来说，光照强度较强，幼苗生长的粗壮，而光照强度较弱幼苗容易徒长。2．光质(lightwave)光质对愈伤组织诱导，培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响。如百合珠芽在红光下培养，8周后，分化出愈伤组织。但在蓝光下培养，几周后才出现愈伤

7、组织，而唐菖蒲子球块接种15d后，在蓝光下培养首先出现芽，形成的幼苗生长旺盛，而白光下幼苗纤细。3．光周期(lightperiod)试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养，最常用的周期是16h的光照，8h的黑暗。研究表明，对短日照敏感的品种的器官组织，在短日照下易分化，而在长日照下产生愈伤组织，有时需要暗培养，尤其是一些植物的愈伤组织在暗下比在光下更好。如红花、乌饭树的愈伤组织。光周期的影响光周期的需要与否，应根据植物种类培养目的来决定。在愈伤组织诱导阶段，一般采用三种做法：全暗、周期性光照、

8、散射性光照，上述两种做法诱导率差异不大。另一些植物差异较大，如石刁柏全暗诱导愈伤组织，要比周期性光照下好得多。大豆愈伤组织诱导采用散射性光照比较好；光照对地钱干重的增加明显地优于黑暗培养。器官发生阶段，一般给予周期性光照比较好。光周期长短因植物种类而异。多数植物8-10小时黑暗为宜。如茄子、苹果等。也有例外，有些植物如石刁柏需要16小时光照，12小时黑暗。光照条件湿度(humidity)湿度的影响包括培养容器保持和环境的湿度条件，容器内主要受培养基水分含