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《血型鉴定、交叉配血操作规程.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、ABO、Rh-D血型鉴定操作规程1.目的：规范ABO、Rh-D检测的操作过程2.标本采集：静脉采血2ml抗凝血,避免溶血试剂3.试剂：长春博讯生物技术有限责任公司4.方法原理【原理】:标准血清中的完全抗体(lgM)抗A、抗B、和抗D能和红细胞表面相应的抗原在盐水介质中发生特异性的凝集反应。根据红细胞凝聚类型可鉴别出A、B、O、AB四型和RHD阴性或阳性。5.操作:一、玻片法(一般只能做正定型)【正定型】:1、取一张玻片,用蜡笔或记号笔将其分为三等份,从左到右每一等份左上角标明A、B、D,2、对应
2、加入抗A和抗B抗D标准血清一滴;3、分别加PC(患者10—15%红细胞悬液);4、用洁净竹签将试剂和红细胞充分混匀,混合物约2cm2大小;5、轻轻地连续倾斜转动玻片2—5分钟,观察并记录;【解释】:A端凝集为A型血;B端凝集为B型血;A、B端均凝集则为AB型;A、B端均不凝集则为O型;D端凝集则为RH阳性者,无凝集则为RH阴性。备注:玻片法可作为ABO血型初筛或复检;不适用于抗体鉴定和交叉配血;不适合检测ABO亚型。二、试管法(盐水介质)【原理】:标准的A型和B型红细胞能和受检者血清(血浆)中相
3、应的抗体发生特异性结合,形成肉眼可见的凝集反应,从而可推断出受检者的血型。【材料】:1、标准A型和B型红细胞悬液(浓度4%,商品有售,亦可自行新鲜配制);2、受试者血清或血清;3、洁净康氏试管。【正定型】:1、取二支洁净试管分别记上抗A和抗B;2、对应加入抗A和抗B血清1滴;3、分别加入病人红细胞悬液1滴(浓度为2%-5%);4、混匀,室温放置5分钟,1000rpm离心1分钟,取出观察结果【解释】:轻摇试管,检查是否凝集,抗A、抗B管均凝集,受试者为AB型血;抗A、抗B管均不凝集,则为O型血;抗
4、A管凝集则为A型血;抗B管凝集则为B型血。【反定型】:1、取二支试管分别记上AC和BC;2、分别加入病人血清;3、对应加入A和B型试剂红细胞;4、混匀室温放置5分钟,1000rpm离心1分钟,取出观察结果;【解释】:首先检查上清液有无溶血,然后轻摇试管,检查是否凝集,A、B管均凝集受试者为O型血;A、B管均不凝集则为AB型血;A管凝集则为B型血;B管凝集则为A型血。3.卡式法(微柱凝胶技术)【原理】:在含有中性胶的微柱管中相继加入红细胞抗体和红细胞,孵育后相应的抗原和抗体则形成免疫复合物,利用凝
5、胶分子排阻原理在一定的离心力下,该复合物不能通过凝胶间隙浮于胶表面或悬于胶中.无相应的抗原和抗体,则不能形成免疫复合物,在一定的离心力下,分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部。可用于ABO血型正反定型,RH血型检测或其它应用完全性抗体的血型检测。【试剂】:血型检测卡ABO试剂红细胞【正定型】:在含有红细胞抗体的微柱凝胶管中加入待检红细胞,孵育后离心观察结果。分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部,凝集的红细胞不能通过凝胶间隙浮于胶表面或悬于胶中。【解释】:抗A、抗B管均凝集(浮于胶表面
6、或悬于胶中),受试者为AB型血;抗A、抗B管均不凝集(沉于微柱腔底部),则为O型血;抗A管凝集则为A型血;抗B管凝集则为B型血。【反定型】:将抗原吸附在红细胞表面,检测与其相应抗体发生的凝集反应。在ABO血型反定型试验中,将人A或B型血型多糖抗原经媒介化合物联结到O型红细胞上(可长期保存),然后将该具有A型抗原或B型抗原红细胞分别与被检血清在微柱凝胶中反应,检测被检血清中ABO抗体.【解释】:A、B管均凝集受试者为O型血(浮于胶表面或悬于胶中);A、B管均不凝集则为AB型血(沉于微柱腔底部);A
7、管凝集则为B型血;B管凝集则为A型血。交叉配血操作规程交叉配血的目的是确保为病人选择合适的血液和测定受试者血清中有无任何不规则的抗体,防止输血后产生溶血性输血反应。交叉配血有两类即主侧交叉、次侧交叉,交叉配血实验的结果,主侧是绝对不可以有凝集和溶血现象,次侧在A或B型人输入O型血时,可以有凝集现象,但不可以有溶血现象。一、盐水交叉配血实验(试管法)【原理】:完全抗体(lgM)在盐水介质中能和相应的抗原发生免疫反应,形成肉眼可见的凝集反应。【试剂】:生理盐水【方法】:1、用生理盐水将受血者红细胞制
8、备2%-5%红细胞悬液;2、从供血者血液保存袋上的辫子中获取少量血样,分离血清,生理盐水三洗红细胞,并用生生理盐水将供血者红细胞制备2%-5%的红细胞悬液;3、取洁净塑料试管2支,标明“主侧”“次侧”;4、按标记“主侧”管加受血者血清2滴,加供血者红细胞悬液1滴。“次侧”管加供血者血清2滴,加受血者红细胞悬液1滴。混匀。以1000g(3400r/min)离心15秒,轻轻晃动试管,肉眼观察结果【解释】:两管无凝集,表明ABO血型配血相合。该法主要用于检出是否有ABO血型定型错误,无法检出由于免疫而
