组织切片染色技术（PPT46页).ppt

《组织切片染色技术（PPT46页).ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、组织切片染色技术学习目标掌握：染色、常规染色的概念；HE染色的基本步骤。熟悉：染色的目的、原理；常用染色术语；染色前后的处理；苏木素-伊红染色液的配制。了解：染色的注意事项。染色概述第一节一、染色的概念就是利用染料在组织切片上给予颜色，使其与组织或细胞内的某种成分发生作用，经过透明后通过光谱吸收和折射，使其各种微细结构能显现不同颜色，这样在显微镜下就可显示出组织细胞的各种成分。染色是制片过程中的一个重要环节二、染色的目的将染料配制成溶液将组织切片浸入染色剂内经一定的时间，组织或细胞及其他异常的成分被染上不同深浅的颜色对光产生不同的折射率便于在光镜下观察。染色的物理作

2、用(1）毛细管作用及渗透作用染色剂与组织细胞没有牢固的结合(2)吸收作用：又称溶解学说。组织吸收染色剂，牢固的结合。组织的着色与溶液的颜色相同。三、染色原理(3)吸附作用是固体物质的特性，即较大的物体能从周围溶液(染液)中吸附一些小颗粒(化合物或离子)到自身的特性。细胞中各种蛋白质或胶体有不同的吸附面，因此能选择性地吸收不同的离子，即某种蛋白质对某种染色剂有吸附作用,而对别种染色剂无吸附作用，这就可以解释鉴别染色现象。三、染色原理染色的化学作用染色剂按性质可分为酸性、碱性和中性染色剂，而动、植物的细胞内一般也可区分为酸性(阴离子)和碱性(阳离子)部分。当碱性染色剂溶

3、液中的有色部分成为阳离子时，就能与细胞的阴离子(酸件部分)较牢固地结合，当酸性染色剂溶液中的有色部分成为阴离子时，就能与细胞内的阳离子(碱性部分)较牢固地结合。三、染色原理例如，细胞核（尤其是核内的染色质）主要由核酸组成，是酸性的组成成分，故和碱性染色剂(苏木精)的亲和力很强，易于着色。细胞质含碱性物质，故和酸性染色剂(伊红)的亲和力很大，易于着色。进行性染色和退行性染色进行性染色：组织成分着色由浅至深，当达到所需要的强度时，终止染色。此种方法无需“分化”，例如，卡红染色。退行性染色：是先把组织浓染过度，超过所需的程度，然后再用某些溶液脱去多余的染色剂，以达到适当的

4、深度，并使不应着色的组织细胞脱色。这个步骤称为“分化”。三、染色原理直接染色，间接染色和媒染剂直接染色：染色无需第三种物质参加，染色剂和组织即可直接结合着色。间接染色：单独染料本身的水溶液或酒精溶液，几乎不能与组织细胞结合或结合的能力很弱，必须有第三种成分——媒染剂参与，才能使染色剂与组织细胞有效地结合起来。媒染剂：通常是双价或三价金属如铝、铁的硫酸盐或氧化物。媒染剂在染色中起着架桥作用，既能与染料结合又能与组织相结合，达到了促进染色的效果。三、染色原理促染剂用以加强染料和组织细胞结合能力的物质称为促染剂促染剂如化学反应中的催化剂，少量存在就有明显的促染作用。它们的

5、作用机制也许是降低表面张力或是改变了染液的pH值。三、染色原理分化剂在退行性染色中，附在组织细胞上多余的染色剂需用某些特定的溶液把目的物以外的部分脱去，从而使目的物与周围组织形成鲜明的对比，同时使目的物本身的色泽也深浅适当。这种选择性地除去多余染色剂的过程称为“分化”，所使用的溶液即“分化剂”。有酸性分化剂、氧化分化剂、媒染分化剂三、染色原理变色反应和正色反应变色反应：染色反应最后目的物所呈现的颜色和染色剂当初的颜色不同。如：黏液用甲苯胺蓝可染成红色，而其余组织则染成不同色调的蓝色。正色反应：染色反应最后目的物所呈现的颜色和染色剂的颜色相同。如：酸性品红总是将组织染

6、成不同色调的红色；淡绿染成不同色调的绿色。三、染色原理四、染色剂（一）染色剂染色的化学基础染色剂分子能够显示颜色的基因，称为发色团。主要的发色团有：－N=N，－N=O，C=O，C=C偶氮基亚硝基羰基烯基含有发色团的苯环化合物，称为色原。苯+发色团=色原染色剂分子中还需具备促使染色剂与组织细胞相结合的基因，这样基因又称为助色团。如—NH2—COOH—OH—SO3H氨基羧基羟基磺酸基四、染色剂（二）染色剂的分类1．按来源分2．按主要用途分3．按染色剂分子中的发色团分4．按染色剂的化学性质分四、染色剂1．按来源分（1）天然染色剂：苏木素、胭脂红、地衣红和番红花。（2）合成

7、染色剂：从煤焦油中提取的苯衍生物。无机化合物，如硝酸银、氯化金、磺、锇酸和高锰酸钾等。四、染色剂2．按主要用途分（1）胞核染色剂：苏木素、胭脂红、甲苯胺蓝、美蓝和孔雀绿等。（2）胞质染色剂：伊红、淡绿、橘黄G、酸性品红和苦味酸等。（3）脂质染色剂：苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑、硫酸尼罗蓝和油红等。四、染色剂3．按染色剂分子中的发色团分（1）亚硝基类：发色团为亚硝基（-NO)，如萘酚缘-B。（2）硝基染料：发色团是硝基（-NO2），如苦味酸。（3）偶氮类：发色团为偶氮基（-N=N-），属于这一类的染色剂有橘黄G、刚果红、俾士麦棕和许多苏丹类的脂质染色剂。（4）醌亚胺类：