血红蛋白的提取与分离ppt课件.ppt

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1、构成细胞和生物体结构的重要物质免疫调节催化运输蛋白质的功能1血红蛋白的提取和分离2(一）回忆蛋白质占细胞干重的50％以上，细胞中含量最多的有机物2、组成元素C、H、O、N，有的含有P、S还有的含Fe、Mn、Zn、I等1、含量3、相对分子质量：10000—1000000之间甚至更高高分子化合物一、基础知识34、基本组成单位氨基酸5、氨基酸通式RHCCOOHNH26、氨基酸连接方式脱水缩合48、蛋白质形成过程7、肽键CONH氨基酸肽链蛋白质脱水缩合盘曲折叠（一条或者多条）510、颜色反应：氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺序变化多端；多肽链

2、的空间结构千差万别9、蛋白质结构的多样性原因：蛋白质+双缩脲试剂紫色6思考高温灭菌和酒精消毒分别利用蛋白质的何种作用，作用结果是什么被破坏？（）A、变性、变性、空间结构B、分解、变性、化学结构C、变性、变性、平面结构D、分解、分解、空间结构A7血红蛋白含有四条肽链,每条肽链环绕一个亚铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳，血红蛋白因含有血红素而呈红色。8人们用鸡的红细胞提取DNA，用哺乳动物成熟的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取，哺乳动物的成熟红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋

3、白含量丰富便于提取血红蛋白思考9看书：64、65页，思考以下问题：1、蛋白质分离的依据是什么？方法是什么？2凝胶色谱法分离蛋白的依据是什么？原理又是什么？其过程怎样？3缓冲液的作用是什么？如何配制？又有何实践意义？10分离蛋白质的依据：(二）蛋白质的分离根据蛋白质各种特性的差异：分子的形状、大小电荷性质和多少溶解度吸附性质对其他分子亲和力11补充：蛋白质的性质两性电解质：可表现酸性也可表现碱性，因为既含酸性基团——羧基，又含碱性基团——氨基可溶于水，呈胶体状盐析：向蛋白质溶液加高浓度无机盐，蛋白质以沉淀析出，再加水稀释，沉淀消失，蛋白质溶解

4、。此过程可逆，不影响蛋白质性质变性：强酸，强碱，高温，重金属作用下蛋白质的空间结构被破坏，蛋白质变性。12(三）蛋白质的分离的方法凝胶色谱法：又称分配色谱法电泳法13（三）凝胶色谱法②实例：葡聚糖、琼脂糖3、凝胶1、别名：分配色谱法①特点：一些微小多孔的球体，内含许多贯穿的通道2、分离蛋白质的依据：蛋白质相对分子质量的大小14原理：当不同的蛋白质通过凝胶时相对分子质量较小相对分子质量较大凝胶内部的通道容易进入无法进入凝胶内部的通道只能在凝胶外部移动路程较长移动速度较慢路程较短移动速度较快相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。154.凝胶色谱

5、法的原理—分子筛效应大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；先洗脱出来小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢，后洗脱出来1617分子量大小直径大小大于凝胶颗粒空隙直径，被阻挡在颗粒的外面小于凝胶颗粒空隙直径，可以进入颗粒内部运动方式垂直向下移动垂直向下移动，无规则扩散进入颗粒内部运动速度较快较慢运动路径较短较长洗脱次序先从凝胶柱洗脱出来后从凝胶柱洗脱出来蛋白质分离和提取的原理18使用凝胶色谱法分离蛋白质实验中,相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程,可表示为图中  （   ）思考B19（四）缓冲溶液1、概念具有缓冲作用的溶液

6、叫做缓冲溶液能够抵制外界的酸或碱对溶液的PH值的影响，维持PH基本不变2、作用3、缓冲溶液的配制通常由1－2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同PH范围内使用的缓冲液204、常见的缓冲溶液成分H2CO3NaHCO3NaH2PO4Na2HPO4思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？磷酸缓冲液，利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察(红色)和科学研究其(活性)21（五）电泳：1、概念带电粒子在电场作用下发生迁移的过程2、原理②在电场的作用下，这些带电分子会向着与

7、其所带电荷相反的电极移动①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的PH下，这些基团会带上正电或负电22③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离233、类型琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳4实例：SDS——聚丙稀酰胺凝胶电泳由单体丙烯酰胺和交联剂N,N′-亚甲基双丙烯酰胺在引发剂和催化剂的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶②聚丙稀酰胺凝胶①应用24蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素③

8、原理④SDS作用为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入SDS25SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只