血红蛋白的提取与分离(上课)课件.ppt

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1、课题3血红蛋白的提取和分离(一）回忆蛋白质占细胞干重的50％以上，细胞中含量最多的有机物2、组成元素C、H、O、N，有的含有P、S还有的含Fe、Mn、Zn、I等1、含量3、相对分子质量:高分子化合物一、基础知识4、基本组成单位:氨基酸脱水缩合5、氨基酸通式RHCCOOHNH26、氨基酸连接方式7、肽键CONH8、蛋白质形成过程氨基酸肽链蛋白质脱水缩合盘曲折叠（一条或者多条）氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺序变化多端；多肽链的空间结构千差万别9、蛋白质结构的多样性原因：构成细胞和生物体结构的重要物质催化运输调节免疫10、颜色反应：蛋白质+双缩脲试剂紫色

2、10、蛋白质的功能血红蛋白含有四条肽链,每条肽链环绕一个亚铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳，血红蛋白因含有血红素而呈红色。分离蛋白质的依据：根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质一凝胶色谱法②实例：葡聚糖、琼脂糖3、凝胶1、别名：分配色谱法①特点：一些微小多孔的球体，内含许多贯穿的通道2、分离蛋白质的依据：蛋白质相对分子质量的大小4、凝胶色谱法的原理原理：当不同的蛋白质通过凝胶时相对分子质量较小相对分子质量较大凝胶内部的通道容易进入无法进入凝胶

3、内部的通道只能在凝胶外部移动路程较长移动速度较慢路程较短移动速度较快相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。二、缓冲溶液1、概念具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液能够抵制外界的酸或碱对溶液的PH值的影响，维持PH基本不变2、作用3、缓冲溶液的配制通常由1－2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同PH范围内使用的缓冲液4、常见的缓冲溶液成分H2CO3NaHCO3NaH2PO4Na2HPO4思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能三、

4、实验操作样品处理——粗分离——纯化——纯度鉴定1、样品处理（一）蛋白质提取和分离步骤(1)血液组成（二）操作过程红细胞（最多）血红蛋白（90％）(2)、样品处理1、红细胞的洗涤：目的是去除杂蛋白。要加入柠檬酸钠防止血液凝固；离心将血液分层，用胶头吸管吸出黄色血浆；用生理盐水洗涤。2、血红蛋白的释放：在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放3、分离血红蛋白溶液：离心分层；滤纸过滤去除脂溶性沉淀层；分液漏斗分出红色透明液体。4、透析：装入透析袋并置于磷酸缓冲液中（PH为7.0）透析。分离血红蛋白溶液有机溶剂（无色透明的甲苯层）脂类物质（白色脂溶性物质沉淀层）血红蛋

5、白溶液（红色透明液体）红细胞破碎物沉（暗红色沉淀物）