实验五 霉菌的形态观察.doc

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1、实验五霉菌的形态观察一、实验目的1.学习并掌握观察霉菌形态的基本方法；2.了解常见霉菌(根霉、毛霉、曲霉、青霉、红曲霉、白地霉)的基木形态特征。二、实验材料1.菌种:根霉(Rhizopussp.)x毛霉(Mucorsp.)>曲霉(Aspergillussp.)^青霉(Penicilliumsp.)、红曲霉(.Monascussp.)的平板培养物,白地霉(Geotrichumcandidum)摇瓶培养液。2.培养基：土豆琼脂培养基(PDA)或察氏培养基。3.溶液或试剂：乳酸石炭酸棉蓝染色液。4.其他：无菌吸管，平皿

2、，载玻片，盖玻片，解剖针，显微镜等。三、实验原理霉菌菌丝比较粗大(菌丝和砲了的直径达到3〜lOum),通常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因而可用低倍、高倍镜观察。霉菌菌丝细胞容易收缩变形，抱了容易飞扬，在制备霉菌标木时，常用乳酸石炭酸溶液作为介质，具有不使细胞变形，可杀菌防腐，不易干燥,能保持较长时间等优点。若加入棉蓝，又具有一定的染色效果。霉菌的有些结构在制片过稈中易被破坏，影响观察，可采用载片培养法。此法便于直接在显微镜下观察，尤H适川丁•根霉的假根、曲霉的足细胞及分生砲了链等结构的肴生和生长情况的观察。并且

3、还可以在同一标木上观察到微生物发育的不同阶段的形态。四、操作步骤(%1)一般观察法：1.点种培养：用接种针沾取斜血少许砲子在无菌的察氏培养基屮央穿刺接种(倒置培养皿穿刺接种)，3CTC下培养7〜10天，形成巨大菌落培养物。2.真接制片：在载玻片屮央加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液于洁净，打开霉菌平板培养物,用解剖针从菌落的边缘挑取少量带有抱了的菌丝，放入载玻片的染液中，细心地把菌丝挑散开，加盖玻片，注意不要产生气泡，置于显微镜下观察，菌丝呈兰色，颜色的深度随菌龄的增加而减弱。观察根霉时，注意观察其菌丝有无横隔、假根、砲

4、了囊柄、砲了囊、囊轴、囊托、抱了囊抱子及厚垣砲了。观察毛霉时，注意观察其菌丝无横隔、饱子囊柄、囊轴、砲了囊饱子及后垣他子。观察曲霉时，注意观察其菌丝有横隔、足细胞、分生他了梗、顶囊、小梗(形状、层数及着生情况)、分生砲子。观察青霉时，注意观察具菌丝有横隔、分生砲了梗、帚状枝(小梗的轮数及对称性)、分生他子。观察红曲霉时，注意观察其菌丝有横隔、分生抱了着生情况、闭囊壳、了囊抱了。(%1)载玻片湿室培养观察法也称载片培养法，用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养,霉菌即在载玻片和盖玻片Z间的有限

5、空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。载片培养法制备的标木片可直接在显微镜下观察，这种培养观察方法保持了霉菌的H然生长状态，尤其适用于根霉的假根、匍匐菌丝，曲霉的足细胞的观察，并且还可在同一标本片上观察霉菌的不同生长阶段的形态。载玻片湿室培养观察法具体操作：1.准备湿室：在培养皿底部铺一-张圆形滤纸片，滤纸片上依次放上“U”形载玻片搁架、载玻片、盖玻片（两片），盖上1111盖，外用纸包扎，高压灭菌（9.8X104Pa）20分钟后，60°C烘箱干燥，备用。2.取菌接种：用接种环

6、挑取少量待观察的霉菌他了，置于湿室的载玻片上，每张载玻片•可接同一菌种的砲了两处。接种时只要将带菌的接种环在载玻片上轻轻碰儿下即可。（接种量要少，以免培养后菌丝过于稠密而影响观察）3.加培养基：用无菌细口滴管吸取少许融化并冷却至45°C的培养基，滴加到载玻片的接种处，培养基应滴得圆而薄，肓径约为0.5cm（滴加量一般以1/2小滴为宜）,注意无菌操作。4.加盖玻片：在培养基未彻底凝固前，用无菌银了将皿内的盖玻片盖在琼脂薄层上,用锻子轻压盖玻片，使盖玻片和载玻片2间的距离相当接近，但不能压扁。（盖玻片不能紧贴载玻片，

7、要彼此留有小缝隙，一是为了通气，二是使备部分结构平行排列，易于观察。）5.倒保湿剂：每川1•倒入约3mL20%的无菌甘汕，使川L内滤纸完全湿润，以保持J11L内湿度，盖上皿盖。制成载玻片湿室，28°C培养。6.观察：将培养好的载玻片取出，置于显微镜下直接观察。五、实验报告1.直接观察根霉、毛霉、曲霉、青霉和红曲霉菌落形态2.制片观察根寄、毛寄、

8、山寄、肯寄和红

9、11

10、霉的形态构造3.对根霉、

11、11

12、霉、青霉和红1山霉作载片培养，观察其形态构造（示教）。六、实验报告1）绘出所观察到的各种霉菌的形态图，注明备部分名称

13、。2）列表比较根霉、毛霉、曲霉、青霉和红曲霉菌落形态、个体形态及繁殖方式的异同点。