临床血液学检验造血检验基本方法细胞化学染色检验ppt课件.ppt

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1、第一章造血与血细胞检验第七节骨髓检查二、细胞化学染色1普通染色免疫细胞化学染色细胞形态学检验技术细胞化学染色2【细胞化学染色概述】细胞化学染色的概念细胞形态学化学（化学反应）酶类、脂类、糖类、铁、蛋白、核酸等细胞化学染色3细胞化学染色的临床应用细胞化学染色的基本步骤帮助识别细胞了解细胞的生理状态及功能辅助诊断及鉴别诊断血液系统疾病取材：新鲜骨髓片或血片制片染色：固定、有色沉淀反应（显色）、复染显微镜检查：观察染色是否成功，观察目标细胞的染色结果填写报告单：定性（阳性/阴性）、半定量（阳性率/阳性

2、积分/阳性程度）登记及存档4固定物理法化学法干燥固定火焰固定蒸汽固定液体固定5偶氮偶联法雪夫反应联苯胺法普鲁士蓝反应金属沉淀法显色6复染的目的在于使各种细胞能显示出来以便于观察。选择复染液的颜色应与有色沉淀的颜色有明显的对比度，即能使细胞结构显示又能清楚地看出细胞化学染色结果复染7（一）用于贫血的细胞化学染色（铁染色）『用于贫血的常规细胞化学染色』外周血网织红细胞计数（Ret/Retic/RC）骨髓铁染色8【复习：外周血网织红细胞计数（Ret/Retic/RC）】『问题』在瑞氏染色下，能否较准确

3、地区别成熟红细胞与未完全成熟的红细胞（网织红细胞）网织红细胞计数有哪两种方法？在手工操作法中，我们染色及观察的是哪种化学物质网织红细胞计数的参考值是多少？有什么临床意义手工活体染色法和仪器法RNA0.5％～1.5％反映骨髓中红系的造血情况，用于贫血的诊断、鉴别诊断及疗效观察不能，未完全成熟的红细胞在瑞氏染色下表现为嗜多色红细胞9【骨髓铁染色】染色原理及方法4Fe3+＋3K4［Fe(CN)6］Fe4［Fe(CN)6］3＋12K+亚铁氰化钾亚铁氰化铁（普鲁士蓝色）酸性贮存铁铁蛋白含铁血黄素10作用液

4、30min流水冲洗5min，待干1％藏红花染1min，水洗待干骨髓片标本片12作用液需要新鲜配制：浓盐酸0.25ml＋1.25ml20%亚铁氰化钾溶液（两者比例为1∶5）23411正常血细胞的染色结果细胞外铁：位于骨髓小粒内或巨噬细胞胞质内（即幼红细胞外）细胞内铁：位于幼红细胞胞质内的铁铁粒幼红细胞：胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。计数100个中幼红和晚幼红细胞中铁粒幼红细胞的百分比即为细胞内铁阳性率铁粒红细胞：胞质中出现蓝色铁颗粒的红细胞环形铁粒幼红细胞：幼红细胞胞质中蓝色颗粒6颗以上，围绕核

5、周1/2以上者病理情况1213细胞外铁（＋＋＋＋）细胞外铁（＋＋＋）细胞外铁（＋＋）细胞外铁（＋＋＋）细胞外铁（＋＋＋）细胞外铁（＋）细胞外铁（－）14铁粒幼细胞铁粒幼细胞幼红细胞环形铁粒幼细胞、铁粒红细胞15参考值骨髓细胞外铁：（+）~（++），约2/3人为（++），1/3人为（+）骨髓细胞内铁：铁粒幼红细胞的阳性率为19%~44%，以I型为主，少数为II型16临床应用：用于贫血的诊断及鉴别诊断贫血细胞外铁细胞内铁缺铁性贫血阴性明显减低或为0铁粒幼细胞性贫血明显增多增高环形铁粒幼细胞（≥15％

6、）骨髓增生异常综合征（MDS）RA-RS常增高增高环形铁粒幼细胞≥15％RCMD-RS非缺铁性贫血溶贫、巨幼贫、再障等正常或增高正常或增高感染、肝硬化、慢性肾炎、尿毒症等增高减低17细胞内铁细胞外铁细胞外铁细胞内铁细胞内铁细胞外铁细胞内铁细胞外铁细胞内铁隐性缺铁缺铁性贫血早期缺铁缺铁性贫血铁转运或利用异常继发性贫血铁负荷铁粒幼细胞贫血巨幼细胞贫血再障MDS红白血病图贫血时铁染色常见的四种情形1819（二）中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP染色）染色原理及方法：Kaplow偶氮偶联法α-磷酸萘酚钠＋

7、H2Oα-萘酚＋磷酸钠＋坚牢蓝RR不溶性棕黑色沉淀pH9.6碱性磷酸酶成熟中性粒细胞胞质中20固定液30s，水洗待干作用液5～15min，水洗，待干1％藏红花3min，水洗，待干新鲜血片标本片12作用液需要新鲜配制：α-磷酸萘酚钠溶液1.5ml，在37℃预热5min＋坚牢蓝RR1.5mg33421正常血细胞的染色结果阳性反应呈棕黑色颗粒，定位于成熟中性粒细胞胞质内。其他细胞呈阴性油镜下计数100个成熟中性粒细胞，记录其阳性程度（－）、（＋）、（2＋）、（3＋）、（4＋），分别记为0、1、2、3、

8、4分。计算阳性细胞总数为阳性率，阳性细胞的分数总和为阳性积分2223NAP（＋＋＋）NAP（＋＋＋＋）NAP（＋＋）NAP（＋＋）NAP（＋）NAP（＋）NAP（－）嗜酸性粒细胞（－）24参考值：阳性率＜40％，阳性积分14～113。各实验室之间可有较大差异，应建立各实验室的参考值临床应用NAP染色主要用于骨髓增生性肿瘤（MPN）的诊断与鉴别诊断。NAP是怀疑骨髓增生性肿瘤时应作的常规细胞化学染色慢粒NAP显著减低，甚至为0，其他MPN为正常或增高慢粒NAP显著减低，甚至为0，类白NAP显著增高