菊花的组织培养1.ppt

《菊花的组织培养1.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、菊花的组织培养学习目标1、熟悉植物组织培养的基本过程。2、理解细胞分化概念及脱分化，再分化。课题重点与难点课题重点：植物组织培养的基本过程。课题难点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。细胞分化，脱分化，再分化。什么叫分化？其实质是什么?什么叫脱（去）分化、再分化？愈伤组织的细胞有什么特点？如何控制细胞的脱分化与去分化？组织培养的过程？以及组织培养的理论基础？阅读32页解决下列问题：一、植物组织培养的基本过程基因的选择性表达（1）细胞的分化①概念：在个体发育中，细胞在形态、结构、生理功能上发生稳定

2、性差异的过程②过程：如：受精卵增殖、生长、分化形成组织、器官、系统④原因：基因在特定的时间和空间条件下的选择性表达的结果③结果：形成不同的细胞和组织概念：细胞的全能性是指已分化的细胞具有发育成完整个体的潜能。原因：是生物体的每一个细胞都含有该物种所特有的全套遗传物质（2）植物组织培养原理：植物细胞的全能性受精卵>生殖细胞>体细胞全能性的比较:细胞全能性表达条件：离体一定的营养物质、激素和其他外界条件（3）几个概念脱分化（去分化）再分化愈伤组织愈伤组织是通过细胞分裂形成的，其细胞排列疏松而无规则，

3、高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。（4）基本过程阅读33页解决下列问题：影响组织培养的因素？菊花组织培养应注意的问题？1、植物材料的选择烟草和胡萝卜的组织培养较为容易枸杞愈伤组织的芽诱导比较难（2）同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝二、影响植物组织培养的因素：（1）不同的植物组织，培养的难易程度差别很大不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要求相对特殊，需配置不同的培养基MS培养基主要成分包括：A、大量元素:N、P、S、K、Ca

4、、Mg等B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等C、有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等2、培养基的配制(MS培养基)D、植物激素：生长素和细胞分裂素讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主。与微

5、生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于细胞分裂，但不利分化先使用细胞分裂素后使用生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率高3、不同植物激素浓度，使用顺序和使用量生长素细胞分裂素：>有利于根的分化生长素细胞分裂素：<有利于芽的分化，抑制根的分化生长素细胞分裂素：＝促

6、进愈伤组织生长生长素和细胞分裂素用量的比例对植物细胞发育方向的影响4、pH、温度、光照pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每日用日光灯照射12h植物组织培养过程:离体组织或细胞植物体脱分化细胞分裂素≈生长素愈伤组织芽根细胞分裂素>生长素细胞分裂素<生长素再分化制备MS固体培养基外植体消毒接种培养栽培三、实验操作移栽冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上配制各种母液配制培养基灭毒实验操作（一）制备MS固体培养基1、配置各种母液2、配置培养基①定容②调PH③培养基的分装3

7、、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝（二）外植体消毒2、消毒：流水冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上（三）接种用70％的酒精喷雾使空气消毒，酒精擦拭工作台并用紫外线照射20分钟1、接种室消毒2、无菌操作要求操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。3、材料的切取和接种4、接种注意事项①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后

8、再接种②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。（四）培养无菌箱中培养，定期消毒，保持适宜的温度，光照