选择培养基介绍.doc

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1、选择培养基介绍：是根据某种或某一类群微生物的特殊营养需要，或对某种化合物的緻感性不同而设计出來的一类培养基。利用这种培养基可用來将某种或某类微生物从混杂的微生物群体屮分离出來.现代基因工程屮也常用选择培养基來筛选具有某些特性的质粒或垂组DNA。例如，从大肠杆菌群中用不含苏氨酸的选择培养基培养苏氨酸背养缺陷型时，只白少数变异恢复型才能生长。在含链霉索的培养基中，若接种对链霉索敏感的大肠杆菌,则只有混在其中的少数对链霉索有抗性的菌株才会生长.2应用：（1）分离微生物基木的培养基通过加青霉素，实现分离纯化酵母菌、霉菌:加高浓度的食盐分离纯化金黄色葡萄球菌。无氮培养基可分离纯化固氮菌。不含有机碳的培

2、养基可分离纯化口养型细菌如硝化细菌。以尿索作为唯一氮源，可选择出只能利用尿索的微生物。例1、下面上木课题将用到的培养基配方，请根据下表冋答问题。编号成分含量①KH2PO41.4g②Na2HPO42.1g③MgSO4.7H2O0.2g④葡萄糖10.0g⑤尿素1.0g⑥琼脂15.0g将上述物质溶解后，用自來水定容到1000mL（1）在该培养基的配方中，为微生物提供碳源的是，提供氮源的是。（2）绝大多数微生物都能利用，但是，只有能合成尿稱的微生物才能分解。（3）分析该培养基的配方，该培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，又是如何进行选择的？解析：碳源是提供碳元索的物质，氮源是提供氮元索的物质。

3、所以碳源、氮源分别是葡萄糖和尿素。绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但只有能合成尿IW的微生物才能分解尿索，所以这种培养垒対微生物有选择作用。选择原则是只有能否利用尿索的微生物才能生长。答案：（1）葡萄糖尿索（2）葡萄糖尿索（3）该培养基对微生物具有选择作用。以尿素作唯一氮源的培养基可以分离到能产生尿腮的微生物。例2、某同学在做微生物实验时，不小心把恻褐固氮菌和酵母菌混在一起,请你设计实验分离得到纯度较高的的圆褐固氮菌和酵母菌的实验步骤，并冋答有关问题：⑴主要步骤：%1制备两种培养基：一种是培养基，另一种的培养基。分别分成两份，依次标上A・A/的B,B/,备用。%1分别向A、B培养基中接种。%1

4、接种后，放在恒温箱中培养3〜4天。%1分别从A、B培养基的菌落屮挑取生长良好的菌种，接种到A/、B/培养基中。%1接种后，把A/、B/培养基放入恒温箱屮培养3~4天。⑵冋答问题：在步骤①中，为保证无杂菌污染，实验屮应采用的主人措施有、第④⑤两个步骤的目的是解析：関褐固氮菌和酵母菌是两种不同的微生物。関褐同氮菌是原核生物，可以尚氮，対抗生索敢感。酵母菌属于真核生物,不能够固氮，对抗生素不嫩感。要分离该两种菌，可以根据它们的不同特性使用选择培养基來设计。在实验屮应该注意灭菌，消除无关变量对实验的秦响。答案：⑴无氮加青專素混合菌⑵培养基高压蒸气灭菌接种环在酒精灯火焰上灭菌接种过程在酒精灯火焰附近进

5、行获得纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌（2）筛选雨组质粒（或鉴别质粒抗药基因的类别）许多细菌拟核外有大量很小的环状DNA分子，这就是质粒。质粒上常有抗生索的抗性基因，例如，以环索抗性基因或卡那霧素抗性基因等，可作为标记基因或具有特殊性能的基因。例3、基因工程中瑕常用的运载体是质粒，作为运载体，需有标记基因，如抗青霍索基因、抗四环索基因等。现欲鉴别某种细菌质粒抗药基因的类别，请设计实验方案并预测结果：材料用具：青霉素、四环索的10力单位溶液，菌种试管，己灭菌的含细菌培养基的培养JIIL,酒精灯，接种环，一次性注射器，蒸饰水，恒温箱。方法步骤：结果预测：解析：本题的实验H的是鉴别某种细菌质粒抗药基因

6、的类别，可以判断出自变最是培养nil■加入抗生索的类型不同（实际上是选择培养基的类型不同），因变戢则是菌落出现状况。注意对照纽的设置（蒸懾水组）。预测应注意科学、全面。答案：第一步：取3个含细菌培养基的培养皿并标上1、2、3号，在酒精灯旁，用3支注射器分別注入1mL蒸馆水、青霉索液、四环素液，并使之分布在整个培养基表面：第二步：将接种环在酒擀灯上灼烧，并在酒精灯火焰旁取菌种，对3个培养JIIL分别接种：第三步：将接种后的3个培养皿放入37C恒温箱培养24h。实验结果可能有4种情况:2号、3号培养皿中都有细菌存活,说明该细菌质粒上有两种抗性基因;2号、3号培养川L屮都没有细菌存活，说明该细菌质

7、粒上没有这两种抗生索的抗性基因；2号培养川冲有细菌存活、3号培养I1II■中没有细菌存活，说明该细菌质粒上有青霉索抗性基因：2号培养IIIL中没有细菌存活、3号培养皿中有细菌存活，说明该细菌质粒上有四环索抗性基因。例4、下图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRkBamHI的酶切位点，ampR为青得索抗性基因，tctR为四环索抗性基因，P启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知H的基因