血根碱对细菌生物被膜的作用研究.pdf

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1、DissertationSubmittedtoZhejiangGongshangUniversityforMaster’SDegreeofEngineeringSTUDYoNTHESANGUINARINEAGAINSTBACTERIALBIOFlLMAuthor：JinghuiWangMajor：FoodScienceandEngineeringSupervisor：ProfessorJianzhongHan毫零≥铹}《擀Dec．2012CollegeofFoodScienceandBiotechnology，Zhejian

2、gGongshangUniversityHangzhou，310035，P．R．China萼

3、；!矢一角㈨工哦鲈一浙一浙江工商大学硕士论文血根碱对细菌生物被膜的作用研究摘要抗生素作为饲料添加剂，对畜禽有保健促长作用。但是它在杀灭细菌的同时，起到筛选耐药菌株的作用，抗生素滥用进一步促使细菌不断的突变，甚至形成细菌生物被膜(bacterialbiofilm，BBF)，影响动物源性的食品安全。发达国家对于抗生素管理越来越严格，北欧甚至禁用抗生素，将兽药残留作为农畜禽产品在国际贸易中的技术壁垒，大大限制了我国畜牧产品国际化进程。在我

4、国，有46．1％的抗生素用于畜牧养殖，迫切需要开发新的无药物残留、无污染、不易产生耐药性并能有效清除生物被膜的绿色抗生素替代物。血根碱(Sanguinarine)在我国资源丰富，而且使用后易降解，对环境污染小，杀菌能力强，并且有可能对生物被膜有效，欧盟已有将血根碱作为饲用抗菌物质的许多探索。因此，血根碱作为饲用添加剂的研制与开发具有非常重要的意义和广阔的市场前景。本文分析血根碱的体外抑菌作用，构建甲型副伤寒沙门氏菌、侵袭性大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌生物被膜，重点研究其对致病菌生物被膜的影响及作用，为血根碱成为绿色的饲用抗生

5、素替代物打下基础。本研究的主要内容和结果如下：(1)血根碱体外抑菌试验。通过试管二倍稀释法测定不同浓度的血根碱对致病菌(金黄色葡萄球菌、侵袭性大肠埃希氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌、蜡样芽孢杆菌)，非致病菌(枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌)的最低抑菌浓度：采用管碟法，研究血根碱对菌的抑制能力，浙江工商大学硕士论文并与国家允许添加的饲用抗生素盐酸霉素比较，结果表明：随着血根碱浓度提高，其抑菌效果逐步增加，O．32g／L的血根碱抑菌效果明显；与盐酸金霉素抑菌效果对比发现，对于致病菌(金黄色葡萄球菌、侵袭性大肠埃希氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌)

6、优于盐酸金霉素，而对益生菌抑制作用较小。(2)细菌生物被膜构建。采用刚果红平板法、银染法定性结合结晶紫染色法对致病菌金黄色葡萄球菌、侵袭性大肠埃希氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌生物被膜鉴定和表征。结果说明成功构建了这三种菌的生物被膜。(3)血根碱对细菌生物被膜的影响。研究血根碱对金黄色葡萄球菌、侵袭性大肠埃希氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌生物被膜影响及作用。结果表明：刚果红平板法定性观察发现血根碱对沙门氏菌、侵袭性大肠埃希氏菌生物被膜影响大于盐酸金霉素；菌落计数法定量研究，得到0．16gm的血根碱作用后三种生物被膜上的细菌数明显减少；血

7、根碱作用后大大减少了甲型副伤寒沙门氏菌、侵袭性大肠埃希氏菌生物被膜上多糖含量；化学鉴定沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌生物被膜，发现主要含有藻酸盐；分光光度法测定得到血根碱作用后，藻酸盐量减少。说明血根碱具有影响沙门氏菌、大肠杆菌生物被膜及胞外多糖的作用；采用原子力显微镜和扫描电子显微镜观测，发现血根碱还可以改变这两种生物被膜结构形态。关键词：血根碱；细菌生物被膜；抑菌；胞外多糖；盐酸金霉素浙江工商大学硕士论文STUDYoNTHESANGUINARINEAGAINSTBACTERIALBIOFILMABSTRACTAsfe

8、edadditives，antibioticshaveeffectonlivestockhealthandgrowth．Butmeykillbacteria,whilescreeningtheroleofdrug-resistantstrains．Theabusingofantibioticspromotestheconstantmutationofbacteria,SOfarastoformabiofilm(bacterialBiofilmsBBF)．Thedrug-resistantstrainsCaninanimalr

9、esidues，thusa虢ctiIlgthesecurityofanimalfood．Inaddition，themanagementsofthedevelopedcountriesareincreasinglystringent，Nordicevenbannedantibiotics．