引物稀释方法.docx

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1、引物稀释方法PCR引物稀释方法（-S为上游引物,-A为下游引物）：1.按照管壁上的nmol数加入10倍的灭过菌的纯化水稀释成100nmol/mL2.各取上游引物（***-S）10uL，下游引物10uL加入到80uL灭过菌的纯化水中稀释成10nmol/mL3.取稀释好的引物混合液2uL做PCR（25uL体系）定量PCR操作步骤参考（以FastStartUniversalSYBRGreenMaster(Rox)Roche为例）1）取0.2mlPCR管，配制如下反应体系2×qPCRMix12.5μl7.5μM基因引物2.0μl反转录产物2.5μlddH2O8.0μl2）PCR扩增预变性95℃

2、，10min循环（40次）95℃，15s→60℃，60s末段延伸60℃，5min溶解曲线75℃→95℃，每20s升温1℃