运动训练联合hADSCs移植对脊髓损伤大鼠运动功能的影响及相关机制的研究.pdf

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1、南万医科大学2011硕士学位论又运动训练联合hADSCs移植对脊髓损伤大鼠运动功能的影响及相关机制的研究J11●·-一■‘■-1乙ombinatlonolexercisetrainin2andnumanadiposederivedmesenchaymalstemcellsmADSCadipose-derivedmesenchaymalstemcellss、IInSItransplantationaffectsfunctionalrecoveryandtherelatedmechanismafterspinalcordinj

2、uryinrats课题来源：自选学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院答辩委员会主席答辩委员会委员张鑫陈银海副教授康复医学与理疗学专业型硕士研究生第二临床医学院高聪教授高庆春教授刘亚杰副教授2014年5月20日广州硕士学位论文运动训练联合hADSCs移植对脊髓损伤大鼠运动功能的影响及相关机制的研究硕士研究生：张鑫指导老师：陈银海副教授摘要研究背景和目的：脊髓损伤(spinalcordinjury，SCI)是一类高致残的中枢神经系统(centralnervoussystem，CNS)疾病。据估计，全球有250余万

3、脊髓损伤患者，每年新发患者超过13万，且多发于青壮年。随着现代医学的发展，SCI后患者的存活率明显上升，但遗留的后遗症严重影响患者生活质量，降低生命预期，给家庭和社会带来沉重的负担。为治疗SCl人们进行了许多探索，但至今，效果并不理想。随着干细胞领域研究的不断深入，发现干细胞能分化为多个胚层的组织细胞，替代损伤等所带来的细胞缺失，同时能分泌多种营养因子，改善损伤局部的微环境，促进损伤的修复，使得细胞移植治疗成为治疗CNS等系统疾病的一种极具前景的方法。多年来，不同种类的干细胞被研究用于治疗多系统的不同疾病，取得了不同的疗效

4、，但随着研究的深入，干细胞治疗也因伦理问题、增殖分化能力、有成瘤致畸等风险而备受争议。近年，随着研究的深入，人们发现间充质干细胞(mesenchymalstromalcell，MSC)无伦理等相关问题、在体内外有很强的增殖分化能力、同时具有较低的免疫源性，成为细胞移植治疗的理想来源。其中脂肪间充质干细胞(Adiposetissue．derivedmesenchymalstemcells，ADSCs)，由于相较于骨髓来源及脐带等来源的MSC，有更强的分化能力，更低的免疫源性，更广的来源，目前被认为是细胞移植治疗SCI的上佳来

5、源。有研究证实，将ADSCs移植治疗SCI相较于骨髓等来源的MSC对减轻损伤，促摘要进损伤后运动、感觉等功能的恢复具有更明显的效果。近来，临床及基础研究证实运动训练对于SCI后运动、感觉等功能的恢复有促进作用和可喜的应用前景。运动训练能提高损伤脊髓组织的可塑性，改善损伤后局部的血液供应，减轻炎症反应、细胞的凋亡，促进中枢神经系统神经营养因子等的表达，促进内源性神经干细胞的迁移分化，对功能的恢复有至关重要的作用。同时相关研究也已证实运动训练还能提高移植细胞的存活能力，对治疗有进一步强化促进作用。随着对SCI后病理生理研究的不

6、断深入，发现SCI后全身及脊髓局部会发生极其复杂的病理生理改变包括神经细胞的凋亡、组织的缺血水肿、炎症细胞的浸润、轴突的断裂、髓鞘的溶解等，且其持续时间根据原发性损伤程度的不同从数月到数年不等。正是由于这种伤后复杂且持续的病理生理变化，使得目前各种单一治疗(细胞移植、运动训练、药物治疗等)的效果十分有限，为此，有研究开始从多方面着手，采取联合治疗来进一步提高治疗效果。相关研究已证实，联合治疗相较于单一治疗能明显改善伤后运动、感觉等功能的恢复。鉴于运动训练能改善脊髓组织的可塑性及局部微环境，促进CNS中营养因子等的表达，提高

7、移植细胞的存活与分化能力；ADSCs移植后能在局部存活、减轻伤后炎症反应、减少细胞的凋亡、减轻胶质瘢痕的生成、促进神经轴突的再生，且目前两者单一治疗对脊髓损伤后神经功能的恢复作用十分有限，我们选择采用联合两者来治疗不完全脊髓损伤，探讨此联合治疗是否能进一步促进伤后运动功能的恢复及相关机制，为临床治疗SCI提供理论依据。方法：1、人脂肪间充质干细胞(hADSCs)的收集、提取、培养及细胞流式鉴定细胞表面标志、细胞周期检测；荧光双标法检测间充质干细胞相关蛋白：波形蛋白(vimentin)、层粘连蛋白(1aminin)、纤连蛋白

8、(fibronetin)；采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞体外分泌脑源性神经营养因子(BDNF)的能力。II硕士学位论文2、采用改良的Allen法制作T10不完全脊髓损伤模型，将造模成功的SD大鼠进行分组：联合治疗组、细胞移植组、运动训练组、损伤对照组，以及假手术(只打开椎板，不造成脊髓损伤)