新城疫病毒诱导人耐顺铂A549肺癌细胞凋亡的研究.pdf

《新城疫病毒诱导人耐顺铂A549肺癌细胞凋亡的研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、周智芝：新城疫病毒诱导人耐顺铂A549肺癌细胞凋亡的研究!新城疫病毒诱导人耐顺铂A549肺癌细胞凋亡的研究研究生：周智芝导师：孟松树副教授中文摘要顺铂(Cisplatin,DDP)是一种疗效显著的抗肿瘤药物，对多种实体瘤均具有较好的临床疗效，因此被广泛应用于癌症的化疗。然而，肿瘤细胞极易对顺铂产生耐药，常导致化疗失败，限制了顺铂的应用。本实验旨在研究新城疫病毒(Newcastlediseasevires，NDV)对人耐顺铂肺癌细胞(A549／DDP)的体内外溶瘤作用及其信号转导机制。研究发现，NDV能特异而高效地在A549／D

2、DP和A549细胞中增殖，且在A549／DDP细胞中的增殖能力更强，但不能在正常细胞中复制。NDV通过激活caspase依赖的细胞凋亡通路、MAPK通路和Akt通路诱导体外培养的A549／DDP细胞凋亡，且对A549／DDP荷瘤裸鼠具有显著的溶瘤效果。本实验首次研究了NDV对耐药肺癌细胞的溶瘤机制，结果表明溶瘤新城疫病毒在临床治疗顺铂耐药肺癌中具有重要的应用前景。取得的研究结果如下：1．采用TCID50法测定病毒滴度，结果表明NDV(FMW株)能特异而高效地在人耐顺铂肺癌细胞(A549／DDP)中增殖，且较在其亲本肺癌细胞(A

3、549)中的增殖能力更强，但不能在MRC．5人胚肺成纤维细胞中增殖。2．FACS(AnnexinV／PI双染法)检测细胞凋亡，结果表明FMW感染能够诱导A549／DDP细胞凋亡，该凋亡过程对于FMW感染具有时间依赖性。3．Hoechst33258染色观察细胞核形态，发现对照组细胞核均呈弥散均匀的椭圆状。FMW感染组部分细胞核切割成大小不等的致密浓染碎块，呈现典型的细胞凋亡形态学特征，进一步显示FMW感染引起A549／DDP细胞凋亡。4．WesternBlot检测凋亡相关通路的活化，结果表明FMW感染激活caspase通路，其中

4、caspase．8介导的外源性凋亡通路起主要作用，此外，MAPK通路和Akt通路也被激活。5．采用pan—caspase抑制剂Z-VAD—FMK(50州)预处理A549／DDP细胞后再感染FMW，FACS(AnnexinV／PI双染法)检测细胞凋亡，发现细胞凋亡被明显抑制，表明FMW诱导的A549／DDP细胞凋亡依赖于caspase的激活。6．分别用Erkl／2、Jnk、p38和Akt通路特异性抑制剂PD98059(20gM)、SP600125(10肛M)、2一SB203580(10“M)或LY294002(10肛M)预处理细

5、胞后再感染FMW，MTT法分析细胞杀伤率。结果显示，抑制MAPK和Akt通路均能抑制FMW诱导的A549／DDP细胞凋亡，表明MAPK和Akt通路参与该凋亡过程。7．H&E染色、TUNEL法分析荷瘤裸鼠肿瘤石蜡切片，发现未感染组细胞基本未见凋亡，而FMW感染组细胞呈现典型的凋亡特征，表明FMW能诱导A549／DDP或A549荷瘤裸鼠肿瘤细胞凋亡。8．采用QRT-PCR分析FMWM基因表达并以TCID50法测定病毒滴度，研究FMW在荷瘤裸鼠瘤内复制能力。结果表明FMW能在A549／DDP或A549荷瘤裸鼠瘤内特异地高效复制，且在

6、A549／DDP移植瘤中复制能力更强。9．测量并计算荷瘤裸鼠肿瘤体积，采用SPSS软件进行数据分析，结果显示，FMW显著抑制荷瘤裸鼠肿瘤生长，对A549／DDP及A549移植瘤的抑瘤效果相近，且能够延长荷瘤裸鼠生存期。本实验首次研究了NDV对耐药肺癌细胞的溶瘤作用，证明NDV通过激活caspase通路、MAPK通路和Akt通路而有效诱导耐顺铂肺癌细胞凋亡，较好地克服了顺铂耐药导致的凋亡下调，对体外培养的A549／DDP细胞和A549／DDP荷瘤裸鼠均具有显著的溶瘤效果。本实验从全新的角度研究了NDV的溶瘤机制，表明NDV有望成

7、为一种治疗顺铂耐药肺癌的理想制剂。关键词：新城疫病毒；顺铂；细胞凋亡；MAPK；Akt周智芝：新城疫病毒诱导人耐顺铂A549肺癌细胞凋亡的研究Newcastlediseasevirusinducesapoptosisincisplatin．resistanthi’adenoc",maA549cellshumanlung[aenocarcmomaAft49cells一1／／W五阳annUIWVO●●．■●Candidate：ZhouZIlizhiSupervisor：associateProf．MengSongshuAbstra

8、ct3一Cisplatin(DDP)isapowerfulanti-cancel"drugwidelyusedinlungCanCel"chemotherapy．However,cisplatinresistancedeveloppedincancercellsweakene