液相色谱-串联质谱法测定饲料原料中26种霉菌毒素.pdf

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1、第43卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第2期2015年2月ChineseJournalofAnalyticalChemistu264～270DOI：10．11895／j．issn,0253-3820．140769液相色谱-串联质谱法测定饲料原料中26种霉菌毒素王瑞国苏晓鸥程芳芳王培龙樊霞张维(中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，农业部农产品质量安全研究重点实验室，北京100081)摘要建立了同时检测玉米、豆粕等饲料原料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇等26种霉菌毒素的液相色谱一串联质谱(LC—MS／MS)方法。玉米和豆粕样品经乙腈一水一甲酸(84：15．9：0．1，V／V)超声

2、提取1h，取1mL上清液经Mycospin400多功能净化柱净化，浓缩干燥，0．25mL水-甲醇一甲酸(95：4．9：0．1，F／V)复溶，上机测定。采用反相C。色谱柱分离，以0．1％甲酸一水和0．1％甲酸一甲醇溶液作为流动相进行梯度洗脱，采用多反应监测离子模式进行定性分析。基质效应考察发现，样品提取液经Mycospin400多功能净化柱净化后，大部分毒素仍有较强的基质效应。因此，采用基质匹配标准曲线外标法进行定量分析。在高、中、低3种添加浓度水平下，26种霉菌毒素的平均回收率为61．9％一119．5％，相对标准偏差介于0．8％～18．6％之间。针对不同目标物，本方法的定量限为0．5～

3、25。关键词液相色谱-串联质谱；饲料原料；多功能净化柱；霉菌毒素1引言霉菌毒素(Mycotoxins)是由某些霉菌在生长过程中产生的有毒次级代谢产物⋯，饲料原料特别易于被各种霉菌毒素污染，从而对动物生产带来各种危害。目前，已经确认化学结构的霉菌毒素达400多种J。其中，对动物生产影响较大的主要有黄曲霉毒素、呕吐毒素、T-2毒素和玉米赤霉烯酮等数十种，导致动物生产性能下降、繁殖力降低、疾病易感性增强和呕吐、腹泻、器官坏死等急性和慢性中毒症状。世界卫生组织将霉菌毒素纳入食品安全体系重点监测内容，我国对食品和饲料中黄曲霉毒素B等重要毒素规定了最高限量标准。传统的霉菌毒素检测方法主要有薄层色谱

4、法(TLC)、酶联免疫法(ELISA)和高效液相色谱法(HPLC)等。这些方法一般只能针对一种或一类结构类似的毒素进行快速筛选、定性或定量检测_3J。事实上，饲料原料中霉菌毒素污染通常是多种霉菌毒素的联合污染。因此，开发多种霉菌毒素同步检测方法具有十分重要的现实意义。由于液相色谱一串联质谱(LC-MS／MS)法集高效分离和多组分定性与定量检测于一体，成为近年来霉菌毒素多残留检测技术的主流方向¨。如赵孔祥等¨建立了在线免疫亲和净化LC—MS／MS检测中草药中1O种霉菌毒素的方法，应永飞等建立了多功能净化柱LC—MS／MS检测饲料中l4种霉菌毒素的方法。郑翠梅等采用LC—TOF—MS同时测

5、定粮食中13种真菌毒素。但是，上述方法需要专用的前处理设备和成本较高的免疫亲和柱，或者需要样品脱脂，正离子和负离子分别检测等较为繁琐的步骤，而且同时检测霉菌毒素的数量仍然比较有限。本研究采用一种商品化的霉菌毒素多功能净化柱对样品进行一次净化和浓缩，不需要脱脂程序，并且通过优化色谱和质谱条件，实现了正、负离子同时测定，做到一次前处理和一次进样同时检测饲料原料中26种霉菌毒素，具有操作简单、快速、成本低、定量准确的特点。2实验部分2．1仪器与试剂超高效液相色谱．电喷雾电离源．串联质谱仪(美国Waters公司)；RVC2—18台式离心浓缩仪(德国CHRIST公司)；3K15高速冷冻离心机(美

6、国Sigma公司)；D37520高速离心机(美国Kendro公司)；Mycospin400多功能净化柱(ROMER公司)；霉菌毒素空白玉米和豆粕样品由国家饲料质量监督检验中2014-08-31收稿；2014—11-21接受本文系“十-'X”农村领域国家科技计划(No．2011BAD26B0405)资助E—mail：suxiaoou@caas．cn第2期王瑞国等：液相色谱-串联质谱法测定饲料原料中26种霉菌毒素265心(北京)惠赠。标准品及由标准品配制的混合标准溶液储备液(溶剂为乙腈)浓度信息见表1。乙腈、甲醇、乙酸铵和甲酸(色谱纯，美国Fisher公司)；实验用水为Milli—Q超纯水

7、。混合标准溶液储备液于0℃保存，使用时分别吸取适量标准储备液，经离心浓缩仪旋干后，用水-甲醇一甲酸(95：4．9：0．1，)溶液溶解，配制成不同浓度的标准系列工作液。2．2样品前处理称取5．00g±0．01g试样于50mL塑料离心管中，加入20mL乙腈一水一甲酸(84：15．9：0．1，V／V)进行提取，涡旋混匀1min，超声提取1h，期间每20min振荡1次。提取完成后，以10000r／min离心10min，取1mL上清液于Mycospin4