超高效液相色谱法快速检测粮食中黄曲霉毒素的含量.pdf

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1、第41卷分析化学(FENXI~AXUZ)研究报告第2期2013年2月ChineseJournalofAnalyticalChemistry223～228DOI110．3724／SP．J．1096．2013．20601超高效液相色谱法快速检测粮食中黄曲霉毒素的含量谢刚王松雪张艳(国家粮食局科学研究院粮油安全室，北京100037)摘要建立了免疫亲和柱净化一超高效液相色谱法快速测定粮食中黄曲霉毒素(Aflatoxins，AF)的检测方法。样品经提取后，用免疫亲和柱净化、浓缩，WatersAcquityUPLCBE

2、HC色谱柱(50minx2．1mm，1．7gm)分离。以甲醇一水(40：60，)为流动相，流速为02mL／min，进样量为1gL，荧光检测器检测，激发波长为360nln，发射波长为440nln，无需衍生。黄曲霉毒素B】，B2，G。，G2的保留时间小于5min，从样品前处理到结果分析整个过程小于45min。根据3倍信噪比的峰响应值，确定黄曲霉毒素(B，，B，G，G)检出限分别为0．15，0．05，0．40，0．06Pg，4种毒素在O4—60．0Pg，02—15．0Pg，1．5～60．0Pg和0．2～15．0P

3、g范围内分别呈线性相关，相关系数值分别为0．9999，0．9999，0．9998和0．9992；在小麦、玉米、稻谷3类样品中加标回收率为774％～1042％，精密度为1．8％～8．9％。本方法无需衍生即可同时测定粮食中4种黄曲霉毒素，适用于粮食中黄曲霉毒素的快速定量测定。关键词粮食；黄曲霉毒素；超高效液相色谱；免疫亲和柱；无衍生1引言黄曲霉毒素(Aflatoxins，AF)是黄曲霉(Aspergillusflavus)、寄生曲霉(A．parasiticus)和模式曲霉(A．nomius)等在合适的温度和湿度

4、条件下产生的真菌毒素，对人畜有强烈的致病性、致癌性，严重危害人体健康，是危害最严重的真菌毒素，在自然界中广泛存在_lJ。污染粮食的黄曲霉毒素主要有B，B，，G。和G。国内外非常重视黄曲霉毒素的防控，为控制黄曲霉毒素的污染，我国在2005年颁布了粮食和食品中黄曲霉毒素B(AFB)的限量标准，2011年最新颁布的国家食品安全标准《食品中真菌毒素限量》规定了玉米、玉米面(渣、片)及玉米制品中AFB的最高限量为20~tg／kg，稻谷、糙米、大米中AFB．的最高限量为10~tg／kg，小麦、大麦、麦片、小麦粉、其它谷

5、物及去壳谷物AFB的最高限量为5~tg／kgl3l。目前AF的检测方法主要有薄层色谱法、胶体金试纸条法]、酶联免疫法或免疫传感器、荧光光谱法¨、液相色谱法或液质联用法卜等方法。薄层色谱法由于操作复杂，目前应用较少，胶体金和酶联免疫方法用于快速筛查，普通液相色谱方法是目前应用最多的定量检测方法。由于黄曲霉毒素B和G接触水以后，会发生荧光猝灭现象，原有较强的荧光特性基本消失，很难用普通液相色谱检测出来，分析时一般需要柱前或柱后衍生”I1】，检测步骤增加，造成分析速度较慢，耗费有机溶剂较多，费时费力。当前急需建立

6、一种更加灵敏、高效、低溶剂量、不需要衍生的微量黄曲霉毒素快速定量方法。根据范德米特(vanDeemeter)方程理论，随着液相色谱系统颗粒度的不断降低，色谱分离度不断提高。近年建立的填料粒径<2gm的超高效液相色谱系统(UPLC)，具有超高分离度、超快速度、超高灵敏度的特点，适于微量决速分析口。】。本研究结合免疫亲和净化手段，基于UPLC分离技术，建立了一种进样量小、分离度高、无需衍生、快速准确、环保的黄曲霉毒素定量分析方法，以满足当前绿色检验的需要。2实验部分2．1仪器与试剂超高效液相色谱仪Acquity

7、UPLC(美国Waters公司)，荧光检测器(FLD，美国Waters公司)，EMPOWER色谱工作站；AflaTest~黄曲霉毒素免疫亲和柱(美国Vicam公司)；玻璃纤维滤纸(GF／B，2012-06—12收稿；2012-09．19接受本文系国家科技部十二五863课题(No．2012AA101609)资助项目E—mail：WSX@chinagrain．org分析化学第41卷90B31TI，英国Whatman公司)；022gm有机滤膜(天津津腾公司)；6位泵流操作架(北京中检维康公司)；PL403IC型电

8、子分析天平(梅特勒上海有限公司)；Pulverisettel4高速旋转粉碎机(德国Fritsch公司)；高速均质器(美国Waring公司)；N．EVAP丁M“氮吹仪(美国OrganomationAssociates公司)。黄曲霉毒素标准品(纯度≥99％，以色列Fermentek公司)，甲醇、乙腈(色谱纯，美国Fisher公司)，实验用水为Milli—O超纯水(美国Millipore公司)。2．2黄曲霉毒素标准溶液