高效液相色谱法测定牛奶中黄曲霉毒素M1的含量-论文.pdf

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1、2014年8月食品研究与并发第35卷第15期FoodResearchAndDevelopment检测分析DOI：10．3969~．issn．1005-6521．2014．15．027高效液相色谱法测定牛奶中黄曲霉毒素M1的含量周贻兵，林野，李磊，王娅芳，刘利亚(贵州省疾病预防控制中心，贵州贵阳550004)摘要：采用高效液相色谱荧光法测定牛奶中的黄曲霉毒素M。。牛奶中的黄曲霉毒素M用乙腈超声提取，离心，上清液浓缩后用50mLPBS缓冲液稀释，过免疫亲和层析柱净化，10％甲醇水溶液10mL淋洗柱，2mL甲醇洗脱，洗脱液氮吹干后，用1O％乙腈水溶液1mL

2、蜗旋溶解残渣，过O．22m滤膜，上机测定。对加入乙腈比例、淋洗液及洗脱液进行了优化，结果表明：m}*：V。=1：2有效的沉淀蛋白避免了过柱堵塞问题，提高了过柱效率。用1O％甲醇水溶液淋洗免疫亲和柱，能有效的去除掉杂质，避免了洗脱液成浑浊现象。该方法的线性范围宽，回收率为89．1％93．5％，相对标准偏差在6．5％一9．7％之间，检出限为O．01I~g／kg，低于1／lO现行食品安全国家标准对食品中黄曲霉毒素M．的限量标准，符合检测要求，适用于对牛奶中黄曲霉素素M．的检测。关键词：黄曲霉毒素M；牛奶；免疫亲和层析柱；高效液相色谱法Determinati

3、onofAflatoxinM1ContentinMilkbyHigh-performanceLiquidChromatographyZHOUYi-bing，LINYe，LILei，WANGYa—fang，LIULi—va(GuizhouCenterforDiseasesControlandPrevention，Guiyang550004，Guizhou，China)Abstract：AnatoxinMlinmilkweredeterminatedusinghigh-performanceliquidchromatographywithfluores-

4、eencedetection．AflatoxinMlinmilkwerefirstlyultrasonicextracted，centrifuged，concentratedandthenpurifiedthroughimmunoafinitycolumn，using10％methanolaqueoussolutionleachingcolumn，driedinnitrogen，vol-umedby10％acetonitrileaqueous．Fheratioofadditionacetonitrile．1eachingsolutionandelue

5、ntwereoptimized．Theresultsshowedthattheratioofthemilksampletoacetonitrilewas1to2inmasstovolumecouldeffectivelypre—cipitateproteinandavoidthecolumnplug．Washingimmunoaffinitycolumnwith10％methanolaqueouscanef-fectivelyremoveimpuritiesandavoidtheturbidphenomenonofeluent．Therecovery

6、ofmethodwithwidelylinearrangewasbetween89．1％to93．5％．relativestandarddeviationbetween6．5％to9．7％andthedetectionlimitis0．01Ixg／kgwhichwaslessthan1／10ofcurrentnationalfoodsafetystandardswithlimitthequantityofaflatoxinMIIThemethodcanbeappliedtothedeterminationthecontentofaflatoxinMl

7、inmilksample．Keywords：aflatoxinMl；milk；immunoaffinitycolumn；high-performanceliquidchromatography黄曲霉毒素M于1993年被世界卫生组织癌症产生尿液中。牛乳及其制品是易受黄曲霉毒素M污研究机构划定为I类致癌物，是一种毒性极强的剧毒染的食品之一，对牛奶中黄曲霉毒素M。准确定量，了物质，主要表现在致癌、致畸、致突变。黄曲霉毒素M．解真实污染水平，对维护人群健康具有重要意义。测是哺乳动物摄入被黄曲霉毒素B．污染的饲料或食品定黄曲霉毒素M．的方法主要有高效液相色谱一

8、串联后，在体内的肝微粒体单氧化酶系催化下，被羟基化质谱法、高效液相色谱法、荧光光度法、酶联免疫法和生成的二次