实验四 酵母菌的形态观察.doc

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1、实验四酵母菌的形态观察，死活细胞鉴别，微生物测量技术,显微镜直接计数法生物科学贺冰冰040012010025周二9、0节一实验目的1.观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。2.了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造及使用原理，掌握测定微生物细胞人小的方法•3.了解血•球计数板的构造和使用方法,学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。二实验原理美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。川美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的

2、新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征2—，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。用于测量微主物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片屮央把5伽长度刻成50等分，或把10mm长度刻成100等分。测量时•，将其放在接目镜屮的隔板上(此处正好与物镜放大的屮间物像重叠)用于测量经显微镜放大示的细胞物象。由于

3、不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此bl镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。镜台测微尺是屮央部分刻有精确等分线的专用载玻片，一般将lnrni等分为100格，每格长10um,每格长(0.01mm),是专门用来校正bl镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，祁要经过物镜和目镜的两次放大成像进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放

4、大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的己知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺,即可求出目镜测微尺每格所代表的实际长度，然示移去镜台测微尺，换上待测标木片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物细胞大小。利用血球计数板在显微镜下育接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是右.观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或砲子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片2间的计数室屮，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（0.Imm2），所以可以根据在显微镜下

5、观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。屮间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上备刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室屮进行。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而毎个屮方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个屮方格，而每个屮方格又分成16个小方格。但无论是哪种规格的计数

6、板，每一个大方格屮的小方格数都是相同的，即16X25=400小方格。170.100mm12-mm400

7、方格的平均值，再乘上16或25,就得出一个大方格屮的总菌数，然后再换算成lml菌液屮的总菌数。下面以一个大方格有25个屮方格的计数板为例进行计算：设五个中方格屮总菌数为A,菌液稀释倍数为B,那么，一个大方格屮的总菌数因lml=lcm3=1000mm3,故lml菌液中的总菌数=A/5*25*10*1000*B同理，如果是16个屮方格的计数板，设五个屮方格的总菌数为"，则lml菌液屮的总菌数二A'/5*16*10*1000*B'三实验器材1菌种：培养48h的酵母菌.2染色液和试剂：0.05%、0.1

8、%吕氏碱性美蓝.3器材：显微镜、血球计数板、目镜测微尺、镜台测微尺、盖玻片、吸水纸、计数器、移液器、擦镜纸。四实验方法1目微尺的校正：把Olympus忖镜的下部罗圈旋下，将日镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入日镜的隔板上，把镜台测微尺置于载物台上，刻度朝上。先川低倍镜观察，对准焦距，视野屮看清镜台测微尺的刻度示，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使两尺重叠，再使两尺的“0”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度，计数两重合刻度Z间日镜测微尺的格数和镜台测微尺的格