[精品]实验八 酵母菌形态观察.doc

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1、实验八酵母形态观察及死活细胞鉴别，微生物大小测定，显微镜直接计数法酵母形态观察及死活细胞鉴别一、实验目的1观察酵母菌的形态和出芽生殖方式2学习区分酵母菌死活细胞的实验方法二、基本原理酵母菌是单细胞真核微生物，通常以出芽方式进行无性繁殖，有的进行分裂繁殖;通过接合产生了囊砲了进行有性繁殖，有性繁殖要在特定培养条件下才能进行。染料美蓝氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞分泌的还原酶，能使美蓝由蓝色的氧化型转变为无色的还原型。借此即可对酵母菌的死活细胞进行鉴别。三、实验器材•1菌种：酿酒酵母•2仪器：显微镜、载玻片、盖

2、玻片等四、实验步骤美蓝浸片的观察(1)在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液屮，混合均匀。(染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。)(2)用银了取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。镜检。(3)将制片放置约3min后再次镜检并对照，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色來区别死活细胞。滴加染液一涂片一加盖玻片一镜检一3min示再次镜检五、实验报告绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征思考题1、酵

3、母死活细胞鉴别的基木原理是什么？微生物大小测定一、实验目的学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法二、基木原理•测微尺：包括目镜测微尺和镜台测微尺。•镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长0.01mm(即10um)。镜台测微尺并不直接用來测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。•目镜测微尺是放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度。由于放大倍数不同，目镜测微尺每小格代表的实际长度不一样。因此，需首先校正目镜测微尺。三、实验器材•1菌种：酿酒酵母•2仪器：目镜测微尺、镜台测微尺

4、、显微镜、载玻片、盖玻片等四、实验步骤•1装目镜测微尺•2校正H镜测微尺•在40X镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动载物台，使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后,仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每格长10pm,所以可得•目尺每格长度（pm）=（台尺格数X10）/目尺格数镜台测徽尺中央部分目尺每格长度（Mm）=（10X10）/60=1.67um•3菌体大小测定；•选择5个左右的细胞进行测定，求平均值；•闘球型育

5、径表示，椭圜型用长轴X宽轴表示。五、实验报告1实验结果（P411）（1）目镜测微尺标定结果：低倍镜下倍目镜测微尺毎格长度是um。高低借镜下倍目镜测微尺每格长度是um。汕镜下倍目镜测微尺每格长度是uim（2）菌体大小测定结果。（毎种菌测3个细胞，取平均值）_2思考题（P422）在不改变日镜和目镜测微尺，而改变不同放大倍数的物镜来测定同一细胞的大小时，其测定结果是否相同？为什么？显微镜貞接计数法一、实验目的1明确血细胞计数板计数的原理2掌握用血细胞计数板进行微生物计数的方法0.1mmA.血球计数板正面计数室管高）/盖玻片A.血球计数板侧面二

6、、基本原理显微镜肓接计数法血球计数板的结构：四条槽构成三个平台；屮间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，一种是一个大方格分成25个屮方格，而每个屮方格又分成16个小方格；另一种是一个大方格分成16个屮方格，每个屮方格又分成25个小方格，无论哪种每个大方格屮的小方格都是400个。每一个大方格边长为1mm,高0」mm,所以计数室的容积为0.1mm3o计数时，通常只用5个屮格内的菌体（饱了）数即可。然后求出每个屮方格的平均值，再乘上25或16,得出一个大方格屮的总茵数，再换算成lml菌液

7、屮的总菌数。若设5个中方格屮总菌数为A,菌液稀释倍数为B,（1）如果是25个屮方格计数板，则计算方法为：lml菌液屮的总菌数二（A/5）X25X104XB=50000AB（个）（2）如果是16个屮方格计数板，则计算方法为：lml菌液屮的总菌数=（A74）X16X104XB=40000A—B（个）三、实验器材•1菌种：酿酒酵母•2仪器：血球计数板、显微镜、载玻片、盖玻片等四、实验步骤1.菌悬液制备以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。2镜检计数室在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需洗淸，吹干后才能进行计数。3加样品

8、将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的酿酒酵母菌悬液有盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用白动进入计数室，一•般计数室均能充满菌液。（取样时先要摇匀菌液，加样时计数室不可有