肾功能不全试验的实验报告.ppt

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1、家兔急性肾功能不全实验目的复制急性中毒性肾衰动物模型，通过对肾功能指标的检测及肾脏形态学改变的观察，了解中毒家兔肾功能的改变。判断、分析致病因素及导致急性肾衰的可能发病机制。实验原理肾脏是一个多功能器官，其主要功能之一是泌尿功能。肾脏通过调节肾血流、肾小球滤过率、肾小管排泌与重吸收以及排泄体内代谢物质以维持机体内环境的稳定。当肾血流量减少，肾小球滤过率下降或肾小管排泌重吸收功能障碍时，肾的泌尿功能受到影响，从而导致肾功能不全。ARF发病机制的中心环节是GFR的降低。肾血流量减少，肾小管阻塞、肾小管原尿

2、回漏或肾细胞损伤等均可导致GFR的降低。本实验通过皮下注射1％HgCl2造成家兔急性肾小管性坏死。通过本实验学习复制急性中毒性肾衰动物模型；观察肾衰家兔的一般状态、酚红排泄率、肌酐清除率等变化；观察急性肾衰时肾脏大体形态；根据实验指标，判断、分析急性肾衰的发病机制及病理生理变化；对急性肾衰的病因、发病机制和功能代谢变化加深理解。实验对象家兔2—3kg。实验药品与器材1％HgCl2、生理盐水、25％氨基甲酸乙酯、0．6％酚红、20％葡萄糖、10％NaOH、手术器械一套，注射器、试管、加样器、721分光光

3、度计、水浴锅、离心机。实验步骤复制肾功能衰竭模型：于实验前一天，取两只家兔，称重，一只皮下或肌肉注射1％HgCl2(o．8～1．0ml／kg)造成急性肾功能衰竭，为实验组兔；另一只皮下或肌肉注射等量的生理盐水(1．0ml／kg)作为对照组兔。实验步骤观察：24h后，比较两组动物的一般状态、活动情况与尿量。家兔称重，耳缘静脉注射25％氨基甲酸乙酯4．0ml／kg，待动物麻醉后，固定于兔台。角膜反射夹肢反射实验步骤家兔心脏采血3~5ml置于一干燥管中（不抗凝），放置10min后，3000r/min离心15

4、min，小心吸取血清置于另一干燥管中，备测血肌酐实验步骤如果心脏采血失败，则颈总动脉采血颈部正中剪毛，切开皮肤，分离左侧颈总动脉，在动脉下穿两根丝线，用一根丝线结扎动脉的远心端，近心端用动脉夹夹闭，在结扎线下方的动脉壁上剪一小斜口，然后向心脏方向插入动脉导管放血3ml备测血肌酐实验步骤分离右侧颈外静脉，插管用于输液。输液速度一定要慢下腹部正中剪毛，在耻骨联合上约1．5cm处做切口，长约4cm，暴露膀胱，用注射器收集2ml尿液于试管中，做尿肌酐检查。实验步骤在膀胱底部，找出两侧输尿管，并分离之。在近膀胱

5、端结扎输尿管，稍等片刻，待其略充盈后，用眼科剪剪一小口，向肾脏方向插入一细塑料管(塑料管事先用肝素冲洗或充满肝素)，结扎并固定，用于收集尿液。实验步骤酚红排泄率测定：1)两组家兔分别耳缘静脉注射o．6％酚红溶液(1ml／kg)，接着从颈外静脉插管处注射20％葡萄糖溶液(30ml／kg)。收集从开始注射酚红起15min或30min的尿液。换算成单位时间的尿量(ml／min)。实验步骤将收集的尿液倒入500ml量筒内，加10％NaOHlOml，用自来水补充至500ml处，混匀后，取出适当量放入与比色管口径

6、相同的试管中与标准比色管比较，得出15min或30min内肾脏酚红排泄率。实验步骤肾脏酚红排泄率：是反映肾血流量与肾小管排泌功能的指标。正常情况下从静脉注入酚红后15min或30min，肾脏酚红排泄率分别＞30%与＞45%。实验步骤血清和尿液肌酐含量测定——苦味酸沉定蛋白法原理：在碱性条件下，苦味酸与（血、尿中）肌酐作用，生成黄红色苦味酸肌酐，使溶液呈色后进行比色测定；然后加醋酸，在酸性环境中，黄红色的苦味酸肌酐被清除，非肌酐物质（假肌酐）呈色，两者比色之差为血及尿中肌酐。按表1、表2的操作步骤测定血

7、清及尿液肌酐。表1血清肌酐测定单位（ml）标准管测定管空白管肌酐标准应用液（0.05mg/ml）0.20__血清_0.20_蒸馏水__0.20碱性苦味酸2.02.02.0实验步骤混匀，37OC水浴30min，以510nm波长比色，空白管调零，读OD值，然后，各管加50%醋酸液两滴，放置6min后，在测OD’值。计算：[Cr]p(mg%)=OD测－OD’测/OD标－OD’标×0.01/0.2×100正常值:0.7～0.8mg%(1mg%=88.4mol/L)。表2尿肌酐测定单位（ml）测定管标准管空白

8、管尿液（原尿或1：50稀释）0.1__尿肌酐标准应用液（0.5mg/ml）_0.1_蒸馏水__0.1碱性苦味酸22212．5%NaoH0.50.50.5实验步骤混匀，放10min后加蒸馏水6。0ml，摇匀，以530nm波长比色，空白管调零，读OD值。计算：[Cr]u(mg%)=OD测/OD标×0.05mg×100ml/0.1ml实验步骤尿肌酐/血肌酐的意义：器质性肾衰时比值＜20；功能性肾衰时比值＞40。内生肌酐清除率(Ccr)：能较准确的反映肾小球滤过