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时间：2020-03-23
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1、色谱技术实验实验一屮药提取液HPLC梯度洗脱条件的优化实验二中药挥发油GC程序升温分析条件的优化•实验三气相色谱■质谱分析（GC・MS）实验四混合染料TLC分离条件的三角形优化……实验一中药提取液HPLC梯度洗脱条件的优化一、目的1.掌握高效液相色谱分析屮，梯度洗脱条件的决定因素。2.熟悉HPLC梯度洗脱条件优化的思路。二、提要对于成分复杂的屮药提取液，测定英HPLC指纹图谱一般采用梯度洗脱的方法。而梯度洗脱条件主要受梯度范国（梯度起始浓度和终止浓度）、梯度斜度及强溶剂种类的影响。其中梯度范围和梯度斜度决定流动相的洗脱强度，
2、可以通过调整梯度范围和梯度斜度，使样品组分的k，值符合13、韦而强溶剂的种类决定流动相的选择性。木实验主要考察不同洗脱系统的溶剂强度对于梯度分离条件的影响。三、实验条件1.高效液相色谱仪；2.ODS柱（C18,4.6mmx150mm,5gm或4.6mmx250mm,5gm）；3.流动相:甲醇一水；流速：lml/mino1.检测器：DAD检测器,检测波长270nm。5・样品：屮药提取液。、操作步骤1.以甲醇一水（5:95）,30min至甲醉（100%）,保持lOmin,观察样品分离效果。2.根据分离结果，调敕梯度范4、围和斜度，即调報甲醉的起始浓度和终止浓度,及浓度变化速率，使屮药提取液各主要组分的K，分布范围在1〜20Z间。观察备组分的分离度。3.分析实验结果，观察流动相起始浓度、终止浓度及浓度变化速率对各组分保留时间及分离度的影响。五、思考题1.梯度洗脱屮，如果色谱峰集屮在整个分析时间的屮间段，即在洗脱的开始和结束的时间里没冇纽•分出现，应如何调整梯度范围？实验二中药挥发油气相色谱分析条件的选择一、目的1.练习气相色谱仪的使用，了解气相色谱仪的基木结构。2・掌握柱温的变化对组分保留时间及分离度的影响。3・掌握稈序升温对复杂样品分离度及5、分析时间的影响。二、提要对于宽沸稈的样品分析，采用稈序升温（单阶程序升温、多阶稈序升温），在分析过程屮柱温随时间而变化，通常是升高柱温。它的优点是减少分析时问。稈序升温条件选择是确定初始温度、初始时间、升温速率、终止温度、终止时间。三、仪器与试剂（1）气相色谱仪（FID检测器）；（2）微量注射器（lgl）;（3）样品：屮药挥发油■干姜挥发油四、操作步骤1.设置实验条件：色谱柱：I卩基苯基交联硅烷柱（30mX0.32mm,0.52pm）；检测室300°C,气化室2500载气流量:N21.2ml/min；分流比30:1。程序升温6、条件（初始试验条件）:50°C,以15°C/min升温至250°C,保持5min。1.根据试验结果，调整初始温度、终止温度以及升温速率，可根据需要设置阶梯形程序升温分离。五、思考题程序升温的初始温度、终止温度及升温速率的对分离度会有什么影响？实验三气相色谱■质谱分析（GC-MS）—、目的1.练习气相色谱•质谱仪的操作，熟悉气质工作站的使川。2.掌握SCAN及SIM的应用。二、提要气质联用技术是在气相色谱分离的基础上，利用质谱作检测器（MSD）,可以得到不同时刻的质谱信息，灵敏度高，选择性好，给定性、定量分析带来方便。在气质联7、用中，质谱检测器采集数据有两种模式：SCAN（全扫描）和SIM（选择离子监测），其中SCAN连续扫描采集选定质荷比范围内所有离子的信号，可以获得化合物的质谱图，通过白动检索能够得到化合物的结构，常用于定性分析，峰形及灵敏度稍差，而SIM只监测采集某儿个所选的特征离子的信号，灵敏度高，峰形好，主要用于定量分析。本实验怦先对样品作SCAN分析，以获得个化合物的质谱图，通过检索进行定性分析，并选择每个化合物的特征离了（一般选丰度较高的），利用所选的特征离子作SIM分析，并比较SCAN和SIM的异同。三、试剂与仪器（1）气相色谱■质8、谱仪（MS检测器）；（2）微量注射器；（3）质谱工作站；（4）样品溶液：混合溶剂四、操作步骤1-实验条件：色谱参数：进样口250°C,分流进样，分流比30:1,色谱柱：甲基苯基硅烷柱（30mX0.25mmX0.25pm）,载气流量:1.2ml/min（He）,接口温度280°C,柱温:60°C,保持lmin,15°C/min,升到200°C,保持Imino质谱参数：溶剂延迟ImimSCAN：30-400质量数，SIM：白选参数进样量：0」卩12.仪器稳定麻作自动调谐；3.调谐完成后，分别用SCAN及SIM采集样品的色谱图，通9、过气质工作站检索各色谱峰可能的结构，讨论、比较两种方法的差异及特点。五、思考题1•讨论SCAN和SIM两种方法的差异及特点。2.木次实验使用的质谱仪的质量分析器是什么类熨的？有何特点？2.溶剂延迟的作用是什么？3.调谐的作用是什么？实验U1混合染料TLC分离条件的三角形优化一、目的1.掌握
3、韦而强溶剂的种类决定流动相的选择性。木实验主要考察不同洗脱系统的溶剂强度对于梯度分离条件的影响。三、实验条件1.高效液相色谱仪；2.ODS柱（C18,4.6mmx150mm,5gm或4.6mmx250mm,5gm）；3.流动相:甲醇一水；流速：lml/mino1.检测器：DAD检测器,检测波长270nm。5・样品：屮药提取液。、操作步骤1.以甲醇一水（5:95）,30min至甲醉（100%）,保持lOmin,观察样品分离效果。2.根据分离结果，调敕梯度范
4、围和斜度，即调報甲醉的起始浓度和终止浓度,及浓度变化速率，使屮药提取液各主要组分的K，分布范围在1〜20Z间。观察备组分的分离度。3.分析实验结果，观察流动相起始浓度、终止浓度及浓度变化速率对各组分保留时间及分离度的影响。五、思考题1.梯度洗脱屮，如果色谱峰集屮在整个分析时间的屮间段，即在洗脱的开始和结束的时间里没冇纽•分出现，应如何调整梯度范围？实验二中药挥发油气相色谱分析条件的选择一、目的1.练习气相色谱仪的使用，了解气相色谱仪的基木结构。2・掌握柱温的变化对组分保留时间及分离度的影响。3・掌握稈序升温对复杂样品分离度及
5、分析时间的影响。二、提要对于宽沸稈的样品分析，采用稈序升温（单阶程序升温、多阶稈序升温），在分析过程屮柱温随时间而变化，通常是升高柱温。它的优点是减少分析时问。稈序升温条件选择是确定初始温度、初始时间、升温速率、终止温度、终止时间。三、仪器与试剂（1）气相色谱仪（FID检测器）；（2）微量注射器（lgl）;（3）样品：屮药挥发油■干姜挥发油四、操作步骤1.设置实验条件：色谱柱：I卩基苯基交联硅烷柱（30mX0.32mm,0.52pm）；检测室300°C,气化室2500载气流量:N21.2ml/min；分流比30:1。程序升温
6、条件（初始试验条件）:50°C,以15°C/min升温至250°C,保持5min。1.根据试验结果，调整初始温度、终止温度以及升温速率，可根据需要设置阶梯形程序升温分离。五、思考题程序升温的初始温度、终止温度及升温速率的对分离度会有什么影响？实验三气相色谱■质谱分析（GC-MS）—、目的1.练习气相色谱•质谱仪的操作，熟悉气质工作站的使川。2.掌握SCAN及SIM的应用。二、提要气质联用技术是在气相色谱分离的基础上，利用质谱作检测器（MSD）,可以得到不同时刻的质谱信息，灵敏度高，选择性好，给定性、定量分析带来方便。在气质联
7、用中，质谱检测器采集数据有两种模式：SCAN（全扫描）和SIM（选择离子监测），其中SCAN连续扫描采集选定质荷比范围内所有离子的信号，可以获得化合物的质谱图，通过白动检索能够得到化合物的结构，常用于定性分析，峰形及灵敏度稍差，而SIM只监测采集某儿个所选的特征离子的信号，灵敏度高，峰形好，主要用于定量分析。本实验怦先对样品作SCAN分析，以获得个化合物的质谱图，通过检索进行定性分析，并选择每个化合物的特征离了（一般选丰度较高的），利用所选的特征离子作SIM分析，并比较SCAN和SIM的异同。三、试剂与仪器（1）气相色谱■质
8、谱仪（MS检测器）；（2）微量注射器；（3）质谱工作站；（4）样品溶液：混合溶剂四、操作步骤1-实验条件：色谱参数：进样口250°C,分流进样，分流比30:1,色谱柱：甲基苯基硅烷柱（30mX0.25mmX0.25pm）,载气流量:1.2ml/min（He）,接口温度280°C,柱温:60°C,保持lmin,15°C/min,升到200°C,保持Imino质谱参数：溶剂延迟ImimSCAN：30-400质量数，SIM：白选参数进样量：0」卩12.仪器稳定麻作自动调谐；3.调谐完成后，分别用SCAN及SIM采集样品的色谱图，通
9、过气质工作站检索各色谱峰可能的结构，讨论、比较两种方法的差异及特点。五、思考题1•讨论SCAN和SIM两种方法的差异及特点。2.木次实验使用的质谱仪的质量分析器是什么类熨的？有何特点？2.溶剂延迟的作用是什么？3.调谐的作用是什么？实验U1混合染料TLC分离条件的三角形优化一、目的1.掌握
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