药用植物组织培养实验.doc

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1、实验一MS培养基母液及激素母液的配置一、实验目的1.掌握MS培养基母液配置的基本方法。2.掌握激索母液配置的基本方法。二、实验原理培养基(culturemedium)是一种人工配置的可供植物组织生长发冇的物质，能满足植物组织生长发冇所需要的各种营养条件。在药用植物组织培养中，配制培养基是LI常工作,MS培养基是纟H•培中常用的一种培养基，其屮含有30多种营养成分，为了避免毎次配制培养基都要对这儿十种成分进行称量，同时为了减少微量试剂在称量时造成的误差，通常将培养基屮的各种成分，按照原最的10倍或100倍分别称帚，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培

2、养基母液(Stocksolution)o每次使用时，按照母液的浓缩倍数加水稀释，制成培养基。配制母液时，可按照药品种类和性状分别配制，单独保存。一般是大量元素可比培养基屮浓度高10倍，微量元索可比培养基浓度高100倍，有机母液可比培养基浓度高100倍。由于铁离了与其它元素混在一起放置时，容易产生沉淀，所以铁盐必须单独配制成铁盐母液，铁盐母液可比培养基浓度高100倍。母液配制中应注意若母液浓度过高或者不恰当地混合，均可引起沉淀，影响培养效果。在配制各种矿物质盐溶液时，丿'V注意加入顺序,如必须把钙盐和硫酸盐或磷酸盐错开，以免形成硫酸钙或磷酸钙

3、沉淀，最好是以一定量水分别溶解后，再按照培养基的排列顺序加入，最后加水定容。除了这三I-多种营养成分外，有时根据培养目的的不同，培养基中还需要加入不同的植物激索，如CTK、2,4-D、NAA、6-BA等，这些生长调节物质需要量很少，为了使用方便和准确，也需要分别配成母液，毎次使用时，按照其浓缩倍数用移液器取合适的量加入培养基屮，一般激素母液浓度为100-1000mg/Lo三、实验器材和试剂1•器材磁力搅拌器、天平、分析天平、三角瓶(1000ml.500ml.100ml).容量瓶、试管、玻璃棒、烧杯、移液器。2•试剂NH4NO3、KH2PO4

4、、KNO3、CaCl2・2出0、MgSO.i-7H2O>KKNa2Mo04・2比0、H3BO3、CuSO4・5出0、MnSO,-H20.CoC12・6H2O、ZnSO4・7出0、肌醇、盐酸硫胺素(VBJ、烟酸、甘氨酸、盐酸毗哆醇(B,)、Na2・EDTA、FeSO,・7出0、IAA、2,4—D、KT、NAA、CTK、KT、95%乙醇、2mol/LHC1。四、实验步骤（一）MS母液的配置1.MS大量元素母液由于各组分的含量较高，一般将大量元素分别配制成10倍的母液，使用时再分别稀释10倍。用量筒量取800ml蒸憎水，倒入1000ml的烧杯中

5、，依次称取：NHiNO3：16.5gKNO3:19gKH2PO4：1.7gMgSOi・7氏0：3.7gCaCl2・2出0：4.4g按顺序倒入烧杯屮，川玻璃棒搅动，或磁力搅拌器搅拌，笫一种化合物完全溶解示再加入第二种，当最后一种完全溶解后，将溶液倒入1000ml的容量瓶屮，用蒸锢水定容至1000ml,然后倒入磨口试剂瓶屮，贴上标签，存放于4°C冰箱屮。2・MS微量元素母液由于各组分的含量低，一般将微量元素配制成100倍母液。依次称取：KI：0.083gH3BO3：0.62gMnSOi・H20：1.69g（MnSOi・4出0：2.23g）ZnS

6、Oi・7H2O：0.86gNa2MoOi・2H.0：0.025gC11SO4・5H20：0.0025gC0CI2•6H20：0.0025g配成IL母液，倒入IL试剂瓶屮，贴上标签，存放于冰箱屮（具体操作同前）。CuSOi・5氏0和CoCl2-6H,0由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分么一，可先配成调整液。分别称取：CuS04-5H20：0.05g和CoCl2-6H20：0.05g各自配成100ml的调整液,然后取5ml就含有0.0025g的量。1.配制MS有机母液一般配制成100倍MS有机母液。依次称取：肌醉：10g烟酸：0.05g

7、盐酸硫胺索（B）：O.Olg盐酸毗哆醇（VBQ：0.05g甘氨酸：0.2g配成1L母液，倒入1L试剂瓶屮，贴上标签，存放于冰箱屮（具体操作同前）。4•配制MS铁盐母液取500ml烧杯，加蒸馅水400ml,称取FeSOi・7H202.78g倒入烧杯中,微加热并不断搅拌使之全部溶解；再取500ml烧杯一只，加蒸憎水400ml,称取Na2・EDTA・2出03.73g,倒入烧杯屮微加热并不断搅拌使Z全部溶解。将两种溶液倒入同一个1000ml的容量瓶屮,混合均匀，再加蒸锚水定容至1000ml，倒入一棕色磨口瓶屮，先放在室温下一段时间令其充分反应，再

8、转入4°C冰箱屮保存。如果将新配叠的溶液立即放入冰箱屮，则会形成沉淀。（二）激素母液的配制备种植物激素需单独配制成母液，一般浓度为lOO-lOOOmg/L。由于多数激素难溶于水,