细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 , 细胞内DNA和RNA的原位显示.ppt

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1、医学细胞生物学实验细胞生物学与遗传学教研室第二次实验Ⅰ细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示Ⅱ细胞内DNA和RNA的原位显示[实验目的]1.掌握酸、碱性蛋白以及DNA和RNA在细胞内的分布情况；2.了解酸、碱性蛋白以及DNA和RNA显色反应的原理和方法。[实验原理]由于不同蛋白质分子所带酸性基团和碱性基团数量不同，生理条件下，整个蛋白质带负电荷多则为酸性蛋白，带正电荷多则为碱性蛋白。可用不同pH值的固绿染色，即可显示细胞内酸性蛋白或碱性蛋白。核酸的存在会影响实验结果用三氯醋酸处理甲基绿和派洛宁是互不混淆、

2、互不影响的两种染色剂，由于其自身分子结构的特点，它们可与两种聚合程度不同的核酸竞争性结合，从而同时显示细胞内DNA和RNA的分布部位。[实验用品]95%乙醇三氯醋酸甲基绿-派洛宁0.1%酸性固绿0.1%碱性固绿[操作流程]暴露胸腔氯仿麻醉取心脏血晾干制血涂片固定20min洗涤90℃三氯醋酸95%乙醇，5-10min2张1张(3张)0.1%酸性固绿5min0.1%碱性固绿45min晾干镜检洗涤晾干洗涤甲基绿-派洛宁10min染色洗涤>1min两人一组，每组制3张血涂片其中只有2张血涂片需经过三氯醋酸处理

3、（为什么？）[注意事项][结果观察]酸性蛋白碱性蛋白DNA和RNA的显示请回答细胞化学法在本次实验中的应用。通过本次实验学到哪些基本操作技能？请描述本次实验的显微观察结果。[作业]评价本次实验的得失本次实验需要巩固的概念细胞化学法本次实验需要掌握的实验技能1.血涂片制作方法2.染色的规范操作方法3.洗涤方法（流水冲洗）4.正确的镜检方法（显微观察技术）[小结]欢迎同学们提问！1.完成实验报告；2.将动物尸体送到实验室门口动物尸体篓；3.清洗并检查自己桌面上的器材（弯盘、镊子等是否齐全）；4.做好显微镜

4、使用登记，盖好防尘罩；5.将用过的载玻片刷洗干净后放入回收盆中;6.盖玻片、吸水纸等扔到垃圾桶中。（弃入水槽中会引起下水道堵塞）镜检后作业与工作值日生工作：1、检查显微镜2、清点检查器材3、清洁公共实验区、打扫卫生4、送交动物尸体5、检查水电门窗安全