免疫学检测中的干扰因素.ppt

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1、免疫学检测方法中的干扰因素和对策第二军医大学附属长海医院实验诊断科沈茜随着基础免疫学研究的深入和现代免疫学理论的建立，使大量免疫学检测技术被不断地创新、发明；在临床疾病诊治的应用中也不断地推陈出新。目前应用免疫学原理检测的检验项目占到三级综合医院检验科全部检验项目的1／4，医疗收入约占1／3。这就要求检验人员不断掌握最新的临床免疫学知识和各种新的检验方法，了解检验项目的基本原理。生化临检要保证实验结果的正确性和可靠性，必须对实验整个过程中各个环节中的干扰因素有比较清楚的掌握和了解。在本次课中主要讨论的是标本本身内在因素、以及由于人为因素对标本处

2、理不当等引起的外在因素、对免疫检测结果造成的影响。在了解这些因素的同时，如何在临床工作中注意和解决这些干扰，以保证结果的准确性。基本概念抗原：是一类能刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答、并能与相应免疫应答产物（抗体或致敏淋巴细胞）发生特异性结合的物质。抗体：是由抗原刺激B细胞经分化增殖形成的浆细胞合成和分泌的，能与相应抗原发生特异性结合并具有多方面免疫功能的球蛋白。基本概念免疫学检测就是利用抗原和抗体高度特异性结合的原理而检测分析微量物质的方法。从20世纪50年代美国学者Berson和Yallow发明了放射免疫测定技术检测胰岛素起，免疫学检测技

3、术经历了从定性到定量；从常量分析到微量、超微量分析；从手工检测到全自动化；从单个标本检测到高通量检测等一系列长足的进步。免疫测定技术均是以标记物示踪作为基础，同位素、荧光素、酶是经典的三大标记免疫测定技术。这三大标记技术发展了各种各样的免疫测定方法，如RIA、ELISA、荧光免疫测定、免疫化学发光测定等，目前应用这三大标记技术的检测试剂盒在临床广为应用。近年来，作为免疫测定发展方向的非同位素标记技术以其敏感、安全等倍受关注。免疫检测技术-标记物标本自身及前处理所造成的干扰因素－类风湿因子（RF）－嗜异性抗体－自身抗体－补体－纤维蛋白－溶血或黄疸

4、－交叉反应物质－外源性物质免疫学检测-干扰因素干扰因素和对策-类风湿因子患者体内存在的类风湿因子能显著干扰许多免疫学检测方法，IgM、IgG型RF可以与免疫检测系统中的捕获抗体及标记二抗的Fc段直接结合，从而导致检测结果假阳性或假性升高。RF对不同检测系统的干扰程度有所差异，影响程度并不与RF的浓度成正比。目前，在临床工作中使用的免疫检测试剂盒大部分均没有很好地防止RF干扰的措施，国外著名公司要好于国内公司。干扰因素和对策-类风湿因子收集10份RF31～＞1000IU/L的患者血清，在美国和欧洲66各临床实验室进行74个项目的免疫竞争法或免疫夹

5、心法检测，仪器和试剂均配套。3445个结果中8.7％为假阳性。错误高值结果中的21％（所有结果的1.8％）引起了临床的错误诊断，在使用RF吸附剂后再检测，错误结果得到纠正。39％的假阳性结果也可在使用RF吸附剂后降低。ClinicalChemistry2002;48(11):2008~2016RF的干扰－对策捕获抗体用F(ab`)2替代完整的IgG标本用连有热变性（63℃，10min）IgG的固相吸附剂（Euroimmune公司）处理（将热变性IgG加入到标本稀释液或血清中同样有效），4℃过夜离心后在检测；检测抗原时，可以用终浓度0.1mol/

6、L2-巯基乙醇(2-ME)等加入到标本稀释液或标本中，使RF（IgM型）降解。干扰因素和对策-嗜异性抗体嗜异性抗体通常是指与其他种类动物的免疫球蛋白产生反应的人类抗体，具有广泛的种特异性。免疫检测系统中大量使用单克隆抗体，嗜异性抗体可与啮齿类动物IgG的Fc段结合。这样嗜异性抗体既可与检测系统中的捕获抗体结合、又可和标记抗体结合，造成检测结果假阳性或假性升高。嗜异性抗体干扰的程度、频率与患者的疾病状态、年龄、性别等无关。干扰因素和对策-嗜异性抗体将11261份血清标本使用荧光时间分辨免疫分析系统（PE公司，二步法、双位点）检测CEA，将缓冲液中

7、加入小牛IgG约210个病人、3.3~4.7%的标本出现假性升高；加入15mg/L热处理小鼠IgG（MAK33）（Roche）可将干扰降为0.86%；同浓度天然小鼠IgG无效；去除捕获抗体或标记抗体的Fc段也可将干扰降至0.1%。ClinicalChemistry2002；48(4):613~621处理方法病人数频率（％）1切除捕获抗体Fc段和加入热处理15mg/LMAK33后结果正常1483.02仅切除捕获抗体Fc段后结果正常410.823切除捕获抗体Fc段或加入15mg/L天然MAK33或15mg/L热处理MAK33后结果正常40.084仅

8、加入15mg/L热处理MAK33后结果正常30.06表1.不同处理方法对嗜异性抗体干扰的排除干扰因素和对策-嗜异性抗体使用Access免疫化学发光检测