微生物与免疫学实验设计.doc

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1、自来水中细菌的培养与染色组员：宋琴、翟亮亮、赵钟慧、呂怡一、材料1 材料、试剂与仪器 实验材料自来水实验试剂牛肉膏蛋白胨NaCl 1mol/LNaOH 1mol/LHCl 灭菌水实验仪器高压蒸气灭菌锅培养皿三角烧瓶天平牛角匙pH试纸（pH5.5-9.0）吸量管麻绳牛皮纸量筒玻璃棒电炉温度计二、 实验方法 灭菌：（1）首先将高压蒸气灭菌锅的内锅层取出,再向外锅内加入适量的水,使水面与三角搁架相平为宜。 （2）放回内层锅,并加入用报纸包好的培养皿、三角烧瓶、。 （3）加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称

2、的方式同时旋紧相对的两个螺旋，使螺旋松紧一致，勿使漏气。（4）用电炉加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅内压力上升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用0.1MPa,121℃,20min灭菌。 （5）灭菌时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时打开排气阀，旋松螺旋，打开盖子，取出灭菌物品。三、水样的采取及试剂配制 放开水龙头使水流5min后，用已灭菌的三角烧瓶接取水样，以待分析。称量 ：牛肉

3、膏蛋白胨培养基的配方如下： 牛肉膏   0.5g 蛋白胨  1.0g NaCl    0.5g 水     200mLpH      7.4～7.6 按培养基配方依次准确的称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在称量纸上，称量后直接放入水中，稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。溶化 ：在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将称好的琼脂放入已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。调pH ：在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原

4、始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.6。反之，用1mol/L HCl进行调节。四、革兰氏染色革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：　1）涂片固定。2）草酸铵结晶紫染1分钟。　　3）自来水冲洗。　　4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。5）水洗，用吸水纸吸去水分。　　6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。7）蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。