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时间:2020-03-17
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1、叶绿素含量的测定(参考李合生)一、实验原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收,利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度,即可用公式计算出提取液中各色素的含量。二、材料、仪器设备及试剂25ml容量瓶14个,分别标号0~6和0Y~6Y(标有Y的装子叶,带0的表示实验组);80%的丙酮;剪刀;手术刀;注射器;长方形硬纸盒三、试验方法与步骤1、叶绿素的提取取一个实验组,从每个培养皿中取出等量个数的材料,用手术刀将根茎叶分开,再单独取叶或茎剪碎,称取叶0.1g左右,茎段0.2g左右;记录各组的质量,然后分别放入对应的容量瓶中,等到所有实验组的叶和茎都装入容量瓶后,再用注射器吸取适量
2、80%的丙酮,加入容量瓶中,并定容至刻度线,摇匀后立即放入预先准备的纸盒中(内用报纸垫着),依次逐个加入。等所有的都加完后,把纸盒放在暗处,提取24小时以上,备用。2、分光光度计测定其OD值打开分光光度计,设置470、663、646nm三个波段,测量次数设为3,间隔10s。预热30min。预热结束后,用80%的丙酮较零,取出遮光下的溶液,从容量瓶中直接倒到比色杯中开始测量,每组试剂测3次。注:之前先测两个实验组,若值偏大,可适当用80%的丙酮稀释,并记录好稀释倍数四、结果计算叶绿素aCa=12.21*A663-2.81*A646叶绿素bCb=20.13*A646-5.03*A
3、663类胡萝卜素Cx=(1000*A470-3.27*Ca-104*Cb)/229叶绿素色素含量=色素浓度*提取液体积*稀释倍数/样品鲜重(mg/g)注:A663、A646、A470分别指在663、646、470nm波长下的吸光度。
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