激活SHH通路对急性脑缺血大鼠突触再生的影响.pdf

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEffectofactivatingtheSHHpathwayonexpressionsynapticregenerationinratswithacutecerebralischemiaByHuayanLiuSupervisor：Prof．JiyuLou，YuzhouWangMedicine：NeurologyTheSecondClinicalCollegeofZhengzhouUniversityMay201

2、4原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：≯f心年J-月驾日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州

3、大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：蠢隙日期：弘7窜年3-月叩日f摘要激活SItH通路对急性脑缺血大鼠突触再生的影响研究生刘花艳导师娄季宇郑州大学第二附属医院神经内科河南郑州450014焦煤集团中央医院神经内科王玉洲河南焦作454002背景和目的随着社会经济的发展及生活方式的转变，脑血管病的发生率每年都在上

4、升，而且愈来愈趋于年轻化，不光是给社会和家庭带来了繁重的负担，同时也给病人带来了心理上的包袱。缺血性脑血管病是脑血管病最常见的一种类型，其致残率、致死率、致畸率极高，其重在早期诊断、早期积极治疗、加强康复锻炼和防止再复发。随着对神经修复学的不断研究，神经再生尤其是突触再生对缺血性脑血管病有着重要意义。最近的研究发现，Shh信号转导通路与缺血性脑血管病的相关表现在突触再生方面。Shh信号通路主要包括Shh信号肽，膜因子Ptch、Smo，下游转录因子Gli三部分，这些成分的逐级信息传递，或者其中因子的突变，都可活化诱导这一途径，

5、最后通过Gli作用于下游靶基因。Shh信号通路激活对脑缺血有保护作用，可以促进突触的再生和重建，促进神经功能的修复。因此，本实验采用线栓法制作大鼠永久性缺血模型，在缺血半暗带区观察SonicHedgehog信号通路的特异性激活剂Purmorphamine分别在不同时问点通路下游分子Glil的表达和突触形成相关蛋白因子SYN、GAP一43的表达，进一步探讨Shh信号转导通路对大脑缺血皮质区突触再生的影响及其机制。材料和方法选用改良后的线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血(PermanentMiddleCerebral摘要Aretery

6、Occlusion．PMCAO)模型。健康雄性的76只sD大鼠(重大约为280—3309)，按随机数字表法将大鼠随机分为假手术组，模型组和药物组，其中假手术组12只，模型组和药物组每组各32只，模型组和药物组根据缺血时间6h，24h，72h，7d分四个亚组，每个亚组8只大鼠。模型制作成功后腹腔注射O．69mg／kg的Purmorphamine为药物组(Purmorphamine粉剂使用前需二甲基酰胺完全溶解)，假手术组和模型组于术后以同样的方式给予等剂量的二甲基酰胺(DMF)溶液注射。按大鼠大脑缺血时间点6h、24h、72h

7、、7d分别采用两种方法取脑，其中4只深度麻醉处死后lmin内取缺血大脑皮质区脑组织，立即投液氮罐中速冻，然后置于一80度冰箱保存，用以检测GlilmRNA的含量；另取4只大鼠采用生理盐水和甲醛心脏灌注，大脑组织甲醛浸泡固定后，脱水、透明、浸蜡后，石蜡包埋，取缺血大鼠大脑皮质顶叶区行脑组织切片。孛士童耋日术1．缺血侧皮质区SYN的测定结果大脑皮层顶叶梗死周围区可见S1rN免疫反应产物为棕黄色颗粒，分布密集，有的连接呈线状为树突脊，正常高表达，缺血时表达减低。缺血侧皮质区灰度值在6h开始降低，72h降低最为显著，7d后开始上升，

8、与假手术组相比各时问点明显降低，差异具有统计学意义(尸<0．05)。药物组在缺血后6h、24h、72h、7d时SYN的表达明显高于模型组，差异具有统计学意义(P<0．05)。2．缺血侧皮质区GAP一43的测定结果大脑皮质顶叶缺血区可见GAP一43免疫反应产物为小点状或细颗粒状沉积，此为GA