特异激活shh信号通路对急性脑缺血大鼠ngf、bdnf表达影响

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3、血性脑血管疾病的恢复过程中发挥着重要作用。其中，神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)与脑源性神经营养因子(brain—derivedneurotrophicfactor,BDNF)--者属于神经生长因子家族，也称神经营养素(UTs)。两者能够促进中枢神经系统的发育，对于神经系统中成熟神经元的正常功能的维持也是非常必要的。Shh信号通路在胚胎发育及神经系统发育过程中扮演十分重要的角色。实验研究证实，脑缺血后激活Shh信号通路可以促进室下区(subventricularzone．svz)神经元细胞的再生

4、。Shh信号通路由以下几部分组成：Shh蛋白、Ptch蛋白、Smo蛋白和锌指转录因子Gli蛋白。Shh信号通路被激活以后，Shh和Ptch结合，解除Smo的抑制效应，Smo可促使细胞核中的Gli蛋白诱导目的基因的表达。下游靶基因Gli蛋白的表达将增加，因此可以将Gli蛋白作为Shh信号是否激活的标志。本实验通过线栓法制作永久性大脑中动脉缺血模型，通过免疫组化法检测缺血侧脑组织中NGF、BDNF的表达，观察Purmorphamine特异激活Shh信号通路后NGF、BDNF的变化进而论述激活Shh信号通路在脑缺血中的神经保护

5、作用。摘要材料与方法选取SD大鼠，运用线栓法制作永久性大脑中动脉缺血模型(MCAO)。选取健康成年雄性sD大鼠110只，SPF级，体重190～2509。实验分组如下：假手术组(A组)；缺血组(B组)；药物干预组(C组)。其中，假手术组10只，缺血组和药物干预组按照时间点的不同可分为5个亚组即6h，24h，48h，72h，7天，每个亚组10只。假手术组只分离血管不插线栓。缺血组和药物干预组采用线栓法造模。药物干预组在造模成功后立即腹腔注射Purmorphamine溶液(0．691mg／kg)。Purmorphamine溶液

6、配制方法：溶于有机溶剂二甲基甲酰胺(DMF)，并且完全溶解。假手术组和缺血组给予同等剂量的DMF。成功造模后，观察实验动物是否具有神经缺损症状，依据标准评分法，评分不达标的动物均弃之不用，排除出组的动物在后续的试验中予以补充。于既定时间点，取出脑组织标本。免疫组化法检测缺血侧脑组织的NGF、BDNF的表达，逆转录聚合酶反应(Real—timePCR)检测缺血侧脑组织Gli．1mRNA的表达。数据处理采用SPSS21．0统计软件处理数据，所有结果均采用均数4-标准差(Z4-s)表示。组间比较用单因素方差分析，两两比较用LS

7、D检验，检验水准：a=0．05。结果1．各组NGF的表达情况假手术组有少量NGF表达。缺血组、药物干预组在缺血后6小时即有表达。24小时表达明显增多，在缺血72小时达到峰值，之后呈下降趋势。缺血组、药物干预组和假手术组相比，NGF表达明显增多，差异具有统计学意义(P<0．05)。药物干预组和缺血组各时间点相比，NGF表达明显增多，差异具有统计学意义(P

8、组相比，BDNF表达明显增多，差异具有统计学意义(P