超高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产调味品中的罗丹明B、结晶紫和孔雀石绿.pdf

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1、第4O卷分析化学(FENXIHUAXUE)来稿摘登第3期2012年3月ChineseJournalofAnalyticalChemistry487～488DO1：10．3724／SP．J．1096．2012．11051超高效液相色谱一串联质谱法同时测定水产调味品中的罗丹明B、结晶紫和孔雀石绿张贞理l1张平申大忠(山东师范大学化学化工与材料科学学院，济南250014)(淄博市产品质量监督检验所，淄博255063)1引言罗丹明B常被违法用于调味品的染色，孔雀石绿和结晶紫因具有消毒和杀菌作用而常被违法应用于水产品养殖中。三者结构类似，都具有高毒、高残留和致癌、致畸、致突变等特点，色谱分离较难，且由

2、于食品基质复杂，对质谱检测影响较大。目前，单独检测3种物质的方法分别有高效液相色谱法川、气相色谱一质谱法[2]、液相色谱一质谱法和液相色谱一串联质谱法Ⅲ，未见有应用固相萃取一超高效液相色谱一串联质谱法对复杂食品基质中上述3种物质同时测定的报道。2实验部分2．1仪器、试剂与材料超高效液相色谱一串联质谱仪(ACQUITYUPLC—QuattroPremierXE，Waters公司)。色谱柱：AcquityUPLCBEHCl8柱(50mmX2．1mm，1．7btm，Waters公司)；固相萃取柱(OASISMCX，60mg／3mL，Waters公司)。罗丹明B、结晶紫、孔雀石绿(Sigma公司)，

3、用乙腈(色谱纯，Fisher公司)配制成标准溶液。2．2色谱-质谱条件流动相A为乙腈，B为O．2％甲酸溶液，流速为0．2mL／min；进样量：1OuL；柱温：35℃，梯度洗脱：0～1min,30％～40％A；1～2min,40％～50％A；2～3min,50％～70％3～5min,70％～90％A；5～6min,90％～70％A：6～7min,70％30％A。电喷雾离子源正离子多反应监测，毛细管电压：3．0kV；离子源温度：120℃；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流量：800L／h；锥孔反吹气流量：50L／h。其它质谱参数见表1。2．3提取称取匀浆后的水产品配料调表1待测物串联质谱参数Ta

4、ble1MS／MSparametersofanalyte味酱2g于具塞离心管中，依次加人1mL2O％盐酸羟胺，1mL0．1mol／L对甲苯磺酸，2．5mL0．1mol／L乙酸铵缓冲溶液和12mL乙腈，漩涡振荡提取5min，低温(5℃)10000r／min离心5min。上清液移至另一离心管中，将残渣捣碎，用12mL乙腈重复提取，合并上清液；加入5g中性氧化铝，漩涡振荡提取5min后，低温(5℃)1×10r／min离心5rain，上清液转定量离子对(Quantificationionpair)。移至分液漏斗中，加人15mL二氯甲烷，10mL水，振摇2rain，静置分层，收集下层有机层，再用10m

5、L二氯甲烷萃取一次，合并有机相于40℃旋转蒸发近干。2．4净化依次用甲醇、O．2％甲酸各3mL活化MCX固相萃取柱，提取物用6mL乙腈溶解后过柱，柱流速低于1mL／min。再用3mLO．2％甲酸，3mL50％甲醇淋洗，最后用3mL10％氨水一甲醇溶液洗脱，洗脱液于40℃旋转蒸发近干，残留物用1mL流动相定容，经0．2m滤膜过滤，供超高效液相色谱一串联质谱测定。3结果与讨论3．1超高效液相色谱条件的优化研究了水一甲醇和水一乙腈两种体系中水相及有机相比、添加物的种类(甲酸和乙酸胺)及添加比例对目标物分离的影响。结果表明，选用乙腈一0．2％甲酸做流动相时，3种染料有较好的分离度，且色谱峰峰型良好，

6、混合标准溶液的MRM及总离子流色谱图见图1。3．2方法检出限和定量限对3种物质混合标准溶液在5×10-～1．0mg／L浓度范围内进行分析，线性相关系数r≥0．997。在空白样品中添加目标化合物，测得该方法的检出限为O．18～O．48~tg／kg。201卜09-15收稿；201卜1卜03接受本文系国家自然科学基金(No．20975062)资助项目*E-mail：dzshen@sdnu．edu．cn488分析化学第4O卷暑q§t／mint／min0*t／mint／rain图1罗丹明B、结晶紫、孔雀石绿标准溶液的(10gg／L)MRM、总离子流色谱图Fig．1Multiplereactionmon

7、itoring，totalioncurrenchromatogramsofRhodamineB，crystalvioletandmalachitestandardsolution(10gg／L)3．3回收率、精密度及实际样品测定在空白水产调味品中添加不同浓度(5．0，20．0和100．0pg／kg)的标准溶液，测得平均回收率分别为罗丹明一一B0Q9昌0．p7％u0～《96．件8％、结晶紫78．4％～90．3％