亚硝酸盐的测定.doc

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1、盐酸萘乙二胺法测定亚硝酸盐的含量1亚硝酸盐的测定(盐酸萘乙二胺法)1.1原理样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸(H2N—C6H4-SO3H)重氮化，产生重氮盐，此重氮盐再与偶合试剂(盐酸萘乙二胺)偶合形成紫红色染料，其最大吸收波长为550nm，测定其吸光度后，可与标准比较定量。1.2仪器和试剂1.2.1仪器   ①小型粉碎机。   ②分光光度计。   ③25ml具塞比色管。1.2.2试剂   ①氯化铵缓冲溶液：在1000ml容量瓶中加人500ml水，然后准确加入20.0ml盐酸，振荡混匀后，再准确加入50ml氢氧化铵，用水稀释至刻度。必要时用稀盐酸

2、和稀氢氧化铵调试pH至9.6～9.7。   ②硫酸锌溶液(0.42mol/L)：称取120g硫酸锌(ZnSO4·7H2O)，用水溶解，并稀释至1000ml。6   ③氢氧化钠溶液(20g/L)：称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1000ml。   ④对氨基苯磺酸溶液：称取10g对氨基苯磺酸，溶于700ml水和300ml冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。   ⑤盐酸萘乙二胺溶液(1g/L)：称职0.1g盐酸萘乙二胺，加60%乙酸溶解并稀释至100ml，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，1周内稳定。 ⑥显色剂：临用前，将盐酸萘乙二胺溶液(1g/L)和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。仅供1

3、次使用。   ⑦亚硝酸钠标准储备液：准确称取250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，用水溶解后移入500ml容量瓶中，加100ml氯化铵缓冲溶液，用水稀释至刻度，混匀，在4℃避光保存。此溶液每毫升相当于500μg的亚硝酸钠。   ⑧亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准储备液1.00ml，置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于5.0μg的亚硝酸钠。1.3操作步骤1.3.1样品的处理 称取约10.00g(粮食称取5.00g)经绞碎混匀的样品，置于250ml烧杯中，加。70ml水和12ml氢氧化钠溶液(20g/L)，混匀，用氢氧化钠溶液(20g

4、/L)调样品pH至8，定量转移至200ml容量瓶中，加l0ml硫酸锌溶液，混匀。如不产生白色沉淀，可再补加2～5ml氢氧化钠溶液，搅拌混匀。置60℃水浴中加热10min，取出后冷至室温，加水至刻度，混匀。放置0.5h，用滤纸过滤，弃去初滤液20ml，收集滤液备用。1.3.2亚硝酸盐标准曲线的绘制 吸取0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml亚硝酸钠标准使用液(相当于0.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0μg的亚硝酸钠)，分别置于25ml具塞比色管中。分别加入4.5ml氯化铵缓冲溶液，2.5ml60％的乙酸，然后立即加入5.0ml显色剂，加水

5、至刻度，混匀，在暗处静置25min，用1cm比色杯(灵敏度低时可换2cm比色杯)，以零管调节零点，于波长550nm处测吸光度，绘制标准曲线。1.3.3样品的测定 6吸取10.0ml样品滤液于25ml具塞比色管中，按标准曲线制备程序，自“分别加入4.5ml氯化铵缓冲液”起依法操作。同时做试剂空白。 1.4结果计算式中：X—样品中亚硝酸盐的含量，mg/kg；     m1—样品的质量，g；     m2—测定用样液中亚硝酸盐的质量，μg；     V1—样品处理液的总体积，ml；     V2—测定用样液体积，ml。结果以算术平均值的二位有效数字表述。1.5说明及注意事项6   硫酸锌

6、溶液作为蛋白质沉淀剂使用，也可用亚铁氰化钾和乙酸锌的混合溶液，利用产生的亚铁氰化锌与蛋白质共沉淀；实验中使用重蒸水可以减少试验误差。2硝酸盐的测定2.1原理   样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，将样品提取液通过镉柱，使其中的硝酸根离子还原成亚硝酸根离子。在酸性条件下，亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成红色染料，经比色测得亚硝酸盐总量，从还原前后亚硝酸盐量即可求得硝酸盐的含量。2.2仪器和试剂2.2.1仪器（1）镉柱   a.海绵状镉粉的制备：投入足够的锌皮或锌棒于500ml200g/L的硫酸镉溶液中，经3～4h，当溶液中的镉全部被锌置换后，用玻璃棒轻轻刮下，取出

7、残余锌皮，使镉沉底，倾去上层清液，以蒸馏水用倾斜法洗涤，然后移入组织捣碎机中，加500ml水。捣碎约2s，用水将金属细粒洗至标准筛上，取20～40目之间的部分。置试剂瓶中，用水封盖保存，备用。b.镉柱装填：如图8—3所示。用蒸馏水装满镉柱玻璃管，并装入2cm高的玻璃棉作垫。将玻璃棉压向柱底，并将其中所包含的空气全部排出，在轻轻敲击下加入海绵状镉至8～10cm高，上面用1cm高的玻璃棉覆盖，上置一个储液漏斗，末端穿过橡皮塞与镉柱玻璃管紧密连接。 图8—3镉柱装置示意图